[Hypoxia promotes erythroid differentiation of human K562 cells by upregulating endothelial PAS domain-containing protein 1 (EPAS1) expression].

分子生物学 生物 转铁蛋白受体 红细胞生成 K562细胞 流式细胞术 基因敲除 血红素 细胞分化 细胞培养 细胞 血红素 内科学 生物化学 基因 贫血 医学 遗传学
作者
Zhan Gao,Jun Xiao,Xiaowei Li,Cuiying Li
出处
期刊:PubMed 卷期号:38 (6): 494-500
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摘要

Objective To investigate the role of endothelial PAS domain-containing protein 1 (EPAS1) gene encoded hypoxia-inducible factor 2α (HIF-2α) in erythroid differentiation of K562 human erythroleukemia cells under hypoxic conditions. Methods K562 cells were treated with 40 μmol/L of hemin and 0.1 ng/mL of cytarabine for erythroid differentiation. After normoxic and hypoxic(50 mL/L O2) incubation, the ratio of CD235a+CD71+ cells was detected by flow cytometry. The percentage of hemoglobin-positive cells was detected by benzidine staining. The level of cell proliferation was detected by CCK-8 assay. The mRNA and protein levels of EPAS1, insulin receptor substrate 2 (IRS2) and γ-globin were detected by real-time quantitative PCR and Wester blot analysis. Besides, the changes in the erythroid differentiation of K562 cells were evaluated after knockdown of EPAS1. Results Hypoxia promoted the erythroid differentiation of K562 cells and upregulated the expression of EPAS1. After EPAS1 kncokdown, the ratio of CD235a+CD71+ cells and hemoglobin-positive cells decreased, and the expressions of IRS2 and γ-globin declined significantly. Conclusion Hypoxia can significantly up-regulate the expression of EPAS1 in K562 cells and promote the erythroid differentiation.

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