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 一种转基因植物核酸标准物质及形貌模拟方法 |
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专利类型： 发明授权 申请(专利)号： CN202210953346.8 申请日： 2022-08-10 授权公告号： CN115029421B 授权公告日： 2022-11-08 多次公布： CN115029421A 申请人： 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所;农业农村部科技发展中心 地址： 100081 北京市海淀区中关村南大街12号 发明人： 李亮;王敏;陈红;周剑;王灏潜;杨梦瑞;梁晋刚 专辑： 工程科技Ⅰ辑 专题： 一般化学工业 主分类号： C12Q1/6851 分类号： C12Q1/6851;C12Q1/6895 国省代码： 11 页数： 13 代理机构： 北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙)代理人： 黄燕 主权项： 1.一种制备转基因植物的核酸标准物质的形貌模拟方法,其特征在于,其包括如下步骤：将两端带有接头的转基因植物的外源目的基因片段与受体植物的基因组核酸混合,通过高低温切换反应将带有接头的外源目的基因片段整合到受体植物的基因组核酸中从而获得核酸混合物,然后进行PCR验证；所述PCR验证是以所述核酸混合物为模板,以外源目的基因的检测引物和探针对所述模板进行PCR获得第一产物,以内标基因的检测引物和探针对所述模板进行PCR获得第二产物,分别检测所述第一产物和第二产物的拷贝数,调整所述外源目的基因片段与所述受体植物的基因组核酸的混合质量比,至所述第一产物与第二产物的拷贝数比例为60%-100%；所述外源目的基因片段两端的接头与受体植物的基因组核酸的部分序列通过碱基互补匹配；所述接头的长度为20bp-25bp；所述高低温切换反应是指：95℃ 20-30s,4℃ 20-30s,20-25个循环；所述PCR验证时对所述模板进行PCR的程序包括：94-98℃,10-30s；50-58℃,30-60s；共20-50个循环。 |
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