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拟南芥色氨酸氨基转移酶1的原核表达、纯化及活性分析
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拟南芥色氨酸氨基转移酶1的原核表达、纯化及活性分析 李小芳方萍萍王卓毅徐沛 中国计量大学生命科学学院/浙江省特色农产品品质及危害物控制技术重点实验室 摘要：表达获得有活性的纯化蛋白是开展蛋白特异性抑制剂筛选的前提。本研究对拟南芥色氨酸氨基转移酶1 (tryptophan aminotransferase of Arabidopsis 1, TAA1)进行了原核表达、纯化及活性分析。首先，通过GenBank查找拟南芥TAA1蛋白编码序列，根据大肠杆菌(Escherichia coli)密码子偏好性进行优化后，将目的序列合成并插入带有His标签的原核表达载体pET24a中，构建原核表达载体pET24a-GST-EKHis-TAA1。转化大肠杆菌BL21(DE3)后，分别给予不同诱导方式(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-thiogalactoside, IPTG)诱导/TB培养基, IPTG诱导/LB培养基,自诱导)进行诱导和培养，诱导产物经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定，发现利用自诱导表达系统、37℃条件下诱导表达16 h表达量最高，并且表达的融合蛋白主要为可溶性形式。选取此最优的表达方式进行放大表达和纯化，得到的融合蛋白经肠激酶(enterokinase, EK)酶解后进行镍离子亲和... 更多 关键词： 拟南芥色氨酸氨基转移酶1 (TAA1);密码子优化;原核表达;蛋白纯化; 基金资助： 浙江省重点研发计划(2021C02041)； 专辑： 农业科技;基础科学 专题： 生物学 分类号： Q943.2 在线公开时间： 2022-10-25 14:40（知网平台在线公开时间，不代表文献的发表时间） |
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