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MDCK-II 细胞的3D培养实验细节求助
搜索技巧
1715
1
田晟源
来自
北京
，
发表于：2023-02-27 22:12:27
最近在进行MDCK-II细胞的3D培养实验，搜索了很多文献但是对于实验细节以及相关材料的列举都很粗略，不知道有没有大神做过这个实验可以提供一下protocol吗？
本帖完毕
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沙发
在水一方
站长
2023-02-28 14:04:01
发布自
乌克兰
，
MDCK-II细胞是一种常用的肾小管上皮细胞系，已经被广泛应用于细胞培养、药物筛选、毒性评价等领域。3D培养是一种新兴的细胞培养技术，可以更好地模拟体内细胞的三维结构和生理功能，因此在组织工程和药物研发等方面具有广泛的应用前景。以下是一个可能适用于MDCK-II细胞的3D培养实验protocol供参考：
材料：
• 96孔超低吸附力平板（Corning Costar，Cat. No. 7007）
• 培养基：DMEM/F-12（Gibco，Cat. No. 11320082）+ 10% FBS（Gibco，Cat. No. 10099141）
• 0.25% 胰岛素溶液（Sigma，Cat. No. I1882）
• Matrigel（Corning，Cat. No. 354234）
实验步骤：
1. 将Matrigel在4℃下解冻，并在冰上预冷。
2. 在96孔超低吸附力平板中加入每孔25μL的Matrigel，然后在37℃的CO2培养箱中孵育30分钟，使Matrigel凝胶化。
3. 在每孔中加入100μL的MDCK-II细胞悬液，密度为2×10^4个/mL。注意避免气泡的产生。
4. 放置在37℃的CO2培养箱中，使细胞在Matrigel中形成3D结构，通常需要3-5天的时间。
5. 每隔一天更换一次DMEM/F-12培养基，加入0.25%胰岛素溶液，以促进细胞的生长和分化。
6. 在所需时间点（通常为3-5天）结束实验，取出细胞，可以进行进一步的分析，如染色、免疫荧光等。
注意事项：
1. Matrigel的浓度可以根据需要进行调整，一般建议使用1-2倍的浓度。
2. 细胞密度也可以根据需要进行调整，但是过高或过低的密度都可能影响细胞的3D结构和功能。
3. 实验过程中需要避免氧气和营养物质的不均匀分布，可以适当搅拌平板，但是不能产生气泡。
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真的非常好
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14小时前
Sn拿来做离子载体吗？这离子半径也太大了吧？
16小时前
去sd数据库下载
1天前
1.ESCI是什么：ESCI即新兴资源引文索引（Emerging Sources Citation Index），是科睿唯安（Clarivate Analytics）在2015年推出的一个新的学术文献索引数据库，它是Web of Science核心合集中的一部分，与SCI、SSCI等共同构成了涵盖自然科学、社会科学、人文科学等多个领域的学术资源网络。其推出旨在满足学术研究不断发展的需求，尤其是对新兴学术资源的关注和评估，为新兴学术资源提供展示平台，也让科研人员能更全面获取全球学术信息，同时为有潜力但未被传统核心索引收录的学术期刊提供成长机会。 2.英文全拼：Emerging Sources Citation Index。 3.学校认可情况：目前国内多数学术机构对ESCI期刊的认可度依然较低，高校和研究机构普遍认可SCI期刊，而不承认ESCI期刊。不过，随着ESCI期刊影响力的提升和学术界的逐步认可，其在国际学术界的地位逐渐提升。例如2025年中科院分区表首次纳入ESCI期刊（年发文量≥5篇即可参与分区），说明ESCI期刊的学术价值和影响力获得了进一步的认可。但具体到学校是否认可，还需看学校的具体规定和政策，建议投稿前咨询目标学校相关部门。 4.分区原因及方式： 分区原因：ESCI分区主要是为了更细致地评估和区分不同期刊的学术水平和影响力，为科研人员、高校和科研机构等在选择期刊、评价科研成果等方面提供更丰富的参考依据。通过分区，可以让人们更清晰地了解各个期刊在所属学科中的相对位置和水平。 分区方式：以2025年中科院分区为例，按照一区为前5%，二区6% - 20%，三区21% - 50%，四区为后50%的划分方式对期刊进行分区。分区的期刊范围包括自然科学、社会科学、人文科学及开放获取期刊等多学科领域，学科大类扩展至21个。 5.ESCI相当于的水平：ESCI并非直接对应南核、北核或普刊这样的国内期刊评价体系，但可以从不同角度进行大致比较： 与SCI、SSCI、A&HCI对比：ESCI与SCI、SSCI和A&HCI等共同组成Web of Science核心合集，但收录标准比传统的SCIE、SSCI、A&HCI三大引文索引更低。SCI主要收录具有较高影响力和成熟度的学术期刊，SSCI主要收录社会科学领域的权威期刊，A&HCI主要收录艺术与人文领域的期刊。而ESCI更侧重于收录具有潜力的新兴学术期刊以及一些在特定领域或地区具有特色的研究成果。可以说ESCI是SCI的候选区，被收录三年后如果满足SCI的收录标准，就有机会被SCI收录，而表现不好的SCIE、SSCI和A&HCI期刊也会被降级为ESCI期刊。 与国内南核、北核、普刊对比：南核（CSSCI）和北核（CSCD）是国内人文社科和自然科学领域的重要期刊评价体系，入选的期刊通常代表了国内较高的学术水平。普刊则是普通期刊，学术影响力相对较低。ESCI收录的期刊涵盖所有学科，整体影响力目前低于南核和北核收录的期刊，但部分ESCI期刊在新兴领域或特定学科有较高的影响力。并且随着ESCI期刊的发展，其影响力也在逐渐提升。从收录难度来看，ESCI的收录标准低于南核和北核，但高于一些普通的普刊
1天前
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材料：
• 96孔超低吸附力平板（Corning Costar，Cat. No. 7007）
• 培养基：DMEM/F-12（Gibco，Cat. No. 11320082）+ 10% FBS（Gibco，Cat. No. 10099141）
• 0.25% 胰岛素溶液（Sigma，Cat. No. I1882）
• Matrigel（Corning，Cat. No. 354234）
实验步骤：
1. 将Matrigel在4℃下解冻，并在冰上预冷。
2. 在96孔超低吸附力平板中加入每孔25μL的Matrigel，然后在37℃的CO2培养箱中孵育30分钟，使Matrigel凝胶化。
3. 在每孔中加入100μL的MDCK-II细胞悬液，密度为2×10^4个/mL。注意避免气泡的产生。
4. 放置在37℃的CO2培养箱中，使细胞在Matrigel中形成3D结构，通常需要3-5天的时间。
5. 每隔一天更换一次DMEM/F-12培养基，加入0.25%胰岛素溶液，以促进细胞的生长和分化。
6. 在所需时间点（通常为3-5天）结束实验，取出细胞，可以进行进一步的分析，如染色、免疫荧光等。
注意事项：
1. Matrigel的浓度可以根据需要进行调整，一般建议使用1-2倍的浓度。
2. 细胞密度也可以根据需要进行调整，但是过高或过低的密度都可能影响细胞的3D结构和功能。
3. 实验过程中需要避免氧气和营养物质的不均匀分布，可以适当搅拌平板，但是不能产生气泡。