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MDCK-II 细胞的3D培养实验细节求助
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2971
1
田晟源
来自
北京
，
发表于：2023-02-27 22:12:27
最近在进行MDCK-II细胞的3D培养实验，搜索了很多文献但是对于实验细节以及相关材料的列举都很粗略，不知道有没有大神做过这个实验可以提供一下protocol吗？
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沙发
在水一方
站长
131
2023-02-28 14:04:01
发布自
乌克兰
，
MDCK-II细胞是一种常用的肾小管上皮细胞系，已经被广泛应用于细胞培养、药物筛选、毒性评价等领域。3D培养是一种新兴的细胞培养技术，可以更好地模拟体内细胞的三维结构和生理功能，因此在组织工程和药物研发等方面具有广泛的应用前景。以下是一个可能适用于MDCK-II细胞的3D培养实验protocol供参考：
材料：
• 96孔超低吸附力平板（Corning Costar，Cat. No. 7007）
• 培养基：DMEM/F-12（Gibco，Cat. No. 11320082）+ 10% FBS（Gibco，Cat. No. 10099141）
• 0.25% 胰岛素溶液（Sigma，Cat. No. I1882）
• Matrigel（Corning，Cat. No. 354234）
实验步骤：
1. 将Matrigel在4℃下解冻，并在冰上预冷。
2. 在96孔超低吸附力平板中加入每孔25μL的Matrigel，然后在37℃的CO2培养箱中孵育30分钟，使Matrigel凝胶化。
3. 在每孔中加入100μL的MDCK-II细胞悬液，密度为2×10^4个/mL。注意避免气泡的产生。
4. 放置在37℃的CO2培养箱中，使细胞在Matrigel中形成3D结构，通常需要3-5天的时间。
5. 每隔一天更换一次DMEM/F-12培养基，加入0.25%胰岛素溶液，以促进细胞的生长和分化。
6. 在所需时间点（通常为3-5天）结束实验，取出细胞，可以进行进一步的分析，如染色、免疫荧光等。
注意事项：
1. Matrigel的浓度可以根据需要进行调整，一般建议使用1-2倍的浓度。
2. 细胞密度也可以根据需要进行调整，但是过高或过低的密度都可能影响细胞的3D结构和功能。
3. 实验过程中需要避免氧气和营养物质的不均匀分布，可以适当搅拌平板，但是不能产生气泡。
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• 0.25% 胰岛素溶液（Sigma，Cat. No. I1882）
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实验步骤：
1. 将Matrigel在4℃下解冻，并在冰上预冷。
2. 在96孔超低吸附力平板中加入每孔25μL的Matrigel，然后在37℃的CO2培养箱中孵育30分钟，使Matrigel凝胶化。
3. 在每孔中加入100μL的MDCK-II细胞悬液，密度为2×10^4个/mL。注意避免气泡的产生。
4. 放置在37℃的CO2培养箱中，使细胞在Matrigel中形成3D结构，通常需要3-5天的时间。
5. 每隔一天更换一次DMEM/F-12培养基，加入0.25%胰岛素溶液，以促进细胞的生长和分化。
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注意事项：
1. Matrigel的浓度可以根据需要进行调整，一般建议使用1-2倍的浓度。
2. 细胞密度也可以根据需要进行调整，但是过高或过低的密度都可能影响细胞的3D结构和功能。
3. 实验过程中需要避免氧气和营养物质的不均匀分布，可以适当搅拌平板，但是不能产生气泡。