β-catenin 在前列腺癌細胞株PC3 內影響轉錄因子Tcf4 蛋白穩定性之新功能的探討

β-catenin 在維持細胞正常生長上扮演兩種重要功能。一種為與 E-cadherin 以及α-catenin 結合作為細胞貼附複合體的次單元之ㄧ， 另一種則為參與β-catenin /Tcf 訊息調控路徑，作為轉錄因子Tcf/Lef family 共同啟動子（coactivator）。β-catenin /Tcf 訊息調控路徑在胚 胎發育､幹細胞新生､細胞癌化的過程當中皆扮演著十分重要的角 色。許多癌症中，包括前列腺癌､皮膚癌､大腸癌以及肝癌上我們都 可以發現，β-catenin 本身或是控制β-catenin 水解與否的分子，皆有 突變的情形。所有的證據均顯示β-catenin 參與癌症的形成但其分子 機制卻還不明。在我們對於前列腺癌的研究當中，為了解β-catenin 如何影響Tcf4 訊息傳遞路徑並參與前列腺癌形成，我們選擇含有Tcf4 訊息之前列腺癌細胞株 PC3，並篩選轉殖入含有flag-tag 的野生型 以及持續活化突變型β-catenin(T41A, S45A)的PC3 當做模式細胞以 研究β-catenin 如何影響Tcf4 訊息傳遞路徑。我們的結果顯示， β-catenin 會增加核內Tcf4 蛋白質含量。而更進一步的證據顯示，此 一現象產生之原因為β-catenin 增強Tcf4 蛋白質穩定性。另外，隨著 核內Tcf4 蛋白質含量增加，Tcf4 所主導之轉錄活性也隨之增加。為 了解β-catenin 是否影響Tcf4 結合到Tcf4 專一DNA 序列，我們抽取 出轉殖入不同型β-catenin PC3 的核內蛋白，利用electrophoretic 3 mobility shift assay 試圖了解β-catenin 是否影響Tcf4 結合於其專一 的DNA 序列，結果我們發現在PC3 上無法看見specific-binding。 同樣在對照組或轉植入持續表現活化型β-catenin 之293 細胞株中 我們也無法看見specific-binding。有趣的是，當我們利用anti-flag antibody-conjugated agarose 將β-catenin 純化出來後，依照相同步 驟跑electrophoretic mobility shift assay 卻可以在之前未純化的 non-specific binding 相同位置發現specific β-catenin-Tcf4-DNA complex。根據此一結果我們推測，這條specific β-catenin-Tcf4-DNA complex 可能隱藏在non-specific binding 的下方。另外，過度表現 β-catenin 卻無法看見super-shift band 則暗示著我們β-catenin 對於 Tcf4 結合到其專一DNA sequence 上為必需。最後，我們想更進一 步了解持續活化突變型β-catenin 是否影響細胞在沒有血清情況下之 存活率，我們的結果顯示，有持續活化突變型β-catenin 的PC3 其存 活率是比對照組來的高出許多。