Establishment of canine adipose-derived mesenchymal stem cells for clinical application

중간엽 줄기세포는 반려동물의 질병이나 고통으로부터 도움을 줄 수 있을 뿐만 아니라, 삶의 질을 향상시키기 위한 치료로 각광 받고 있다. 최근, 체외배양을 통하여 구축된 중간엽 줄기세포의 안전성과 효율성에 관한 조사가 이루어지고 있는 실정이다. 따라서, 본 연구에서는 반려견의 지방조직으로부터 중간엽 줄기세포를 확립하였다. 비글견 두 마리로부터 지방 조직을(5g) 채취하여 collagenase type I 처리 후 2-6×10SUP6/SUP 세포를 획득하였으며, 젤라틴이 코팅된 75T flask에서 배양하였다. 배양 48시간 후 대부분이 flask에 부착되었으며 섬유아세포와 같은 형태를 가지고 있는 것을 관찰하였다. 배양 5일 후 90% 이상 자란 것을 확인하였고, 계대배양을 실시하였다. 중간엽 줄기세포 마커인 CD44와 CD90을 이용하여 Flow cytometry로 분석한 결과 높게 발현되는 것을 확인하였다. 중간엽 줄기세포의 지방, 연골, 골로 분화능을 확인하기 위하여 Oil red O, alizarin red 그리고 alcian blue로 염색을 진행하였다. 그 결과 분화 유도 4주째에 지방 분화의 경우 Oil red O 염색시 강하게 발현되는 것을 확인하였다. 또한 연골 분화의 경우 calcium nodules과 염색으로 분화가 진행되었음을 확인하였다. 골 분화의 경우 alizarin red로 염색되는 것을 관찰하였다. 또한, 체외 배양한 개 지방 유래 중간엽 줄기세포의 핵형을 확인해 본 결과 78개로 정상적인 것을 확인하였다. 따라서, 본 연구에서는 개 지방 조직으로부터 중간엽 줄기를 성공적으로 확립하였으며, 이는 질병으로부터 고통 받는 반려견에게 유익한 치료 수단으로 이용될 수 있을 것으로 사료된다.