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Activation of Wnt Signaling Pathway by Human Papillomavirus E6 and E7 Oncogenes in HPV16-Positive Oropharyngeal Squamous Carcinoma Cells

Wnt信号通路 基因沉默 连环素 生物 蛋白酶体 癌症研究 泛素 分子生物学 细胞培养 MG132型 信号转导 细胞生物学 蛋白酶体抑制剂 基因 生物化学 遗传学
作者
Theodore Rampias,Eleni Boutati,Eirini Pectasides,Clarence T. Sasaki,Panteleimon Kountourakis,Paul Weinberger,Amanda Psyrri
出处
期刊:Molecular Cancer Research [American Association for Cancer Research]
卷期号:8 (3): 433-443 被引量:117
标识
DOI:10.1158/1541-7786.mcr-09-0345
摘要

Abstract We sought to determine the role of human papillomavirus (HPV) E6 and E7 oncogenes in nuclear β-catenin accumulation, a hallmark of activated canonical Wnt signaling pathway. We used HPV16-positive oropharyngeal cancer cell lines 147T and 090, HPV-negative cell line 040T, and cervical cell lines SiHa (bearing integrated HPV16) and HeLa (bearing integrated HPV18) to measure the cytoplasmic and nuclear β-catenin levels and the β-catenin/Tcf transcriptional activity before and after E6/E7 gene silencing. Repression of HPV E6 and E7 genes induced a substantial reduction in nuclear β-catenin levels. Luciferase assay showed that transcriptional activation of Tcf promoter by β-catenin was lower after silencing. The protein levels of β-catenin are tightly regulated by the ubiquitin/proteasome system. We therefore performed expression analysis of regulators of β-catenin degradation and nuclear transport and showed that seven in absentia homologue (Siah-1) mRNA and protein levels were substantially upregulated after E6/E7 repression. Siah-1 protein promotes the degradation of β-catenin through the ubiquitin/proteasome system. To determine whether Siah-1 is important for the proteasomal degradation of β-catenin in HPV16-positive oropharyngeal cancer cells, we introduced a Siah-1 expression vector into 147T and 090 cells and found substantial reduction of endogenous β-catenin in these cells. Thus, E6 and E7 are involved in β-catenin nuclear accumulation and activation of Wnt signaling in HPV-induced cancers. In addition, we show the significance of the endogenous Siah-1–dependent ubiquitin/proteasome pathway for β-catenin degradation and its regulation by E6/E7 viral oncoproteins in HPV16-positive oropharyngeal cancer cells. Mol Cancer Res; 8(3); 433–43
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