PMA诱导人中性粒细胞胞外诱捕网（NETS）形成的方法及其结构的研究

目的：建立佛波酯（PMA）诱导人中性粒细胞NETS形成的方法,并研究NETS的结构组成。方法：提取人中性粒细胞,使用10、30、90 n M的PMA分别刺激细胞2、3、4 h,采用核酸染料sytox green染色后,通过共聚焦显微镜检测和比较各组NETS的形成情况,并通过活性氧（ROS）探针对NETS进行荧光染色,对弹性蛋白酶（Elastase）、髓过氧化物酶（MPO）和组蛋白H3（Histone H3）进行免疫荧光染色。结果：PMA低于30 n M刺激细胞4 h都不会产生NETS,90 n M刺激3 h就会形成NETS,使用90 n M刺激中性粒细胞4 h后,其形成的NETS含量最高,显著高于30 n M刺激4 h及90 n M刺激3h（P〈0.05）。免疫荧光染色结果显示NETS结构上含有大量ROS和Elastase,含有少量MPO,几乎不含Histone H3。结论：90 n M PMA刺激中性粒细胞4 h可促进NETS形成,其含有大量ROS和Elastase。