ANK、ENPPl及TGF-β1基因在大鼠终板软骨细胞传代培养中的表达变化及意义

目的：通过大鼠终板软骨细胞体外自然传代的退变模型，探讨传代过程中钙化相关基因ANK、ENPPl及内源性生长因子TGF—βl表达的变化及其意义。方法：取大鼠腰椎终板软骨细胞，采用酶消化法及自然传代法分离培养，选取P1、P5及P7代，均在体外培养6d，分别用HE染色、甲苯胺蓝染色及Real—timeRT—PCR法检测软骨标志性基因Ⅱ型胶原、蛋白多糖、转录因子Sox9变化，对终板软骨细胞表型进行鉴定。用Real·timeRT—PCR及Westernblot检测钙化相关基因ANK、ENPPl的变化，Re．al—timeRT—PCR及ELISA检测生长因子TGF-βl的变化。结果：随着细胞传至P7代，细胞形态上有梭形变趋势。茜素红染色无明显变化。软骨标志性基因Ⅱ型胶原、蛋白多糖及转录因子Sox9表达均明显下调（P〈0．05），钙化相关基因ANK、ENPPl表达均明显下调（P〈0．05），内源性生长因子TGF-B1表达明显下调（P〈0．05）。结论：终板软骨细胞传至P7代，终板软骨细胞发生退变，终板软骨细胞内未见钙盐沉积，钙化相关基因ANK、ENPPl下调可能由内源性TGF-βl下调引起，提示调节内源性TGF-βl及钙化相关基因ANK、ENPPl在终板软骨中的表达有可能会阻止椎间盘的退变。