A rapid boiling method for the preparation of bacterial plasmids

质粒 离心 细菌 色谱法 化学 限制性酶 培养皿 质体制备 基因组DNA 生物 DNA 微生物学 生物化学 PBR322电话 遗传学
作者
David S. Holmes,Michael E. Quigley
出处
期刊:Analytical Biochemistry [Elsevier BV]
卷期号:114 (1): 193-197 被引量:3313
标识
DOI:10.1016/0003-2697(81)90473-5
摘要

A simple and rapid method for preparing plasmids for restriction enzyme analysis has been developed. Bacteria are boiled for 15–40 s and an insoluble clot of genomic DNA and debris is removed by low-speed centrifugation. Plasmids are recovered from the supernatant by isopropanol precipitation and can be resuspended in buffer and immediately restricted. A 5-ml bacterial culture yields enough plasmids for many restriction enzyme digestions, but a single colony on a petri dish or a 0.5-ml miniculture will suffice for a few experiments. In addition, the procedure can be readily adapted for the preparation of plasmids from liter cultures with quantitative yields.
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