已入深夜,您辛苦了!由于当前在线用户较少,发布求助请尽量完整的填写文献信息,科研通机器人24小时在线,伴您度过漫漫科研夜!祝你早点完成任务,早点休息,好梦!

Comprehensive deletion scan of anti-CRISPR AcrIIA4 reveals essential and dispensable domains for Cas9 inhibition

清脆的 Cas9 领域(数学分析) 计算生物学 功能(生物学) 生物 基因 遗传学 数学分析 数学
作者
Annette B. Iturralde,Cory A. Weller,Simone M. Giovanetti,Meru J. Sadhu
出处
期刊:Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America [National Academy of Sciences]
卷期号:121 (48)
标识
DOI:10.1073/pnas.2413743121
摘要

Delineating a protein's essential and dispensable domains provides critical insight into how it carries out its function. Here, we developed a high-throughput method to synthesize and test the functionality of all possible in-frame and continuous deletions in a gene of interest, enabling rapid and unbiased determination of protein domain importance. Our approach generates precise deletions using a CRISPR library framework that is free from constraints of gRNA target site availability and efficacy. We applied our method to AcrIIA4, a phage-encoded anti-CRISPR protein that robustly inhibits SpCas9. Extensive structural characterization has shown that AcrIIA4 physically occupies the DNA-binding interfaces of several SpCas9 domains; nonetheless, the importance of each AcrIIA4 interaction for SpCas9 inhibition is unknown. We used our approach to determine the essential and dispensable regions of AcrIIA4. Surprisingly, not all contacts with SpCas9 were required, and in particular, we found that the AcrIIA4 loop that inserts into SpCas9’s RuvC catalytic domain can be deleted. Our results show that AcrIIA4 inhibits SpCas9 primarily by blocking PAM binding and that its interaction with the SpCas9 catalytic domain is inessential.
最长约 10秒,即可获得该文献文件

科研通智能强力驱动
Strongly Powered by AbleSci AI
科研通是完全免费的文献互助平台,具备全网最快的应助速度,最高的求助完成率。 对每一个文献求助,科研通都将尽心尽力,给求助人一个满意的交代。
实时播报
雨雨雨雨雨完成签到,获得积分10
1秒前
初见发布了新的文献求助10
1秒前
2秒前
桐桐应助林小昀采纳,获得10
2秒前
7秒前
8秒前
向日葵完成签到,获得积分10
8秒前
11秒前
14秒前
15秒前
时雨完成签到 ,获得积分10
17秒前
zzz完成签到 ,获得积分10
20秒前
asdf发布了新的文献求助10
21秒前
善学以致用应助burrrrr采纳,获得10
21秒前
Owen应助啦啦啦采纳,获得10
21秒前
JamesPei应助WWZ采纳,获得10
22秒前
大模型应助科研通管家采纳,获得10
27秒前
Lucas应助科研通管家采纳,获得10
27秒前
斯文败类应助科研通管家采纳,获得10
27秒前
乔达摩悉达多完成签到 ,获得积分10
28秒前
29秒前
啦啦啦完成签到,获得积分10
29秒前
31秒前
啦啦啦发布了新的文献求助10
32秒前
万能图书馆应助joasuka采纳,获得10
32秒前
burrrrr完成签到,获得积分10
34秒前
笑点低薯片完成签到,获得积分10
34秒前
burrrrr发布了新的文献求助10
37秒前
大方紫安完成签到 ,获得积分10
42秒前
WWZ完成签到,获得积分10
44秒前
sword完成签到,获得积分10
53秒前
大模型应助江峰采纳,获得10
54秒前
土狗完成签到,获得积分10
55秒前
55秒前
云朵云朵飘呀飘完成签到,获得积分10
1分钟前
1分钟前
小熊同学发布了新的文献求助10
1分钟前
远志完成签到,获得积分10
1分钟前
江峰发布了新的文献求助10
1分钟前
酷波er应助倩倩采纳,获得10
1分钟前
高分求助中
【此为提示信息,请勿应助】请按要求发布求助,避免被关 20000
Les Mantodea de Guyane Insecta, Polyneoptera 2500
Computational Atomic Physics for Kilonova Ejecta and Astrophysical Plasmas 500
Technologies supporting mass customization of apparel: A pilot project 450
Brain and Heart The Triumphs and Struggles of a Pediatric Neurosurgeon 400
Cybersecurity Blueprint – Transitioning to Tech 400
Mixing the elements of mass customisation 400
热门求助领域 (近24小时)
化学 材料科学 医学 生物 工程类 有机化学 物理 生物化学 纳米技术 计算机科学 化学工程 内科学 复合材料 物理化学 电极 遗传学 量子力学 基因 冶金 催化作用
热门帖子
关注 科研通微信公众号,转发送积分 3782466
求助须知:如何正确求助?哪些是违规求助? 3327919
关于积分的说明 10233716
捐赠科研通 3042869
什么是DOI,文献DOI怎么找? 1670261
邀请新用户注册赠送积分活动 799662
科研通“疑难数据库(出版商)”最低求助积分说明 758904