小鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养、纯化及鉴定

目的探讨分离、培养、纯化和鉴定小鼠骨髓间充质干细胞（mesenchymal stern cells，MSCs）方法，观察MSCs体外生长特征。方法取小鼠胫骨和股骨，取出骨髓细胞，用1.073g／ml的Percoll分离液梯度离心，培养皿培养、换液除去非贴壁细胞，获得MSCs，通过传代对MSCs进行纯化和扩增培养。进行形态学观察，测定生长曲线，用流式细胞仪检测P3代MSCs细胞周期及表面抗原。结果新分离的MSCs呈小圆形，形态规整。培养传代后，细胞大小均匀，形态较一致，多为梭形。P1、P2、P3代MSCs生长曲线均呈s型。P3代MSCs75．27％的细胞处于G0—G1期。P3代MSCsCD44表达阳性，表达率为88．71％，CD34表达阴性。结论利用密度梯度离心法联合贴壁培养法分离纯化骨髓MSCs，在含15％FBS的DMEM—LG培养基中培养MSCs，可获得稳定生长的昆明小鼠MSCs。培养的MSCs细胞系性状稳定，表型稳定均一，适于做进一步研究。