清晨好,您是今天最早来到科研通的研友!由于当前在线用户较少,发布求助请尽量完整的填写文献信息,科研通机器人24小时在线,伴您科研之路漫漫前行!

High-fidelity KKH variant of Staphylococcus aureus Cas9 nucleases with improved base mismatch discrimination

生物 引导RNA 突变 DNA 核酸酶 遗传学 计算生物学 Cas9 核糖核酸 基因组 碱基对 突变 基因
作者
Chaya T. L. Yuen,Dawn Thean,Becky K.C. Chan,Peng Zhou,Cynthia C. S. Kwok,Hoi Yee Chu,Maggie S.H. Cheung,Bei Wang,Yee Man Chan,Silvia Y. L. Mak,Anskar Y.H. Leung,Gigi C.G. Choi,Zongli Zheng,Alan S.L. Wong
出处
期刊:Nucleic Acids Research [Oxford University Press]
卷期号:50 (3): 1650-1660 被引量:13
标识
DOI:10.1093/nar/gkab1291
摘要

Abstract The Cas9 nuclease from Staphylococcus aureus (SaCas9) holds great potential for use in gene therapy, and variants with increased fidelity have been engineered. However, we find that existing variants have not reached the greatest accuracy to discriminate base mismatches and exhibited much reduced activity when their mutations were grafted onto the KKH mutant of SaCas9 for editing an expanded set of DNA targets. We performed structure-guided combinatorial mutagenesis to re-engineer KKH-SaCas9 with enhanced accuracy. We uncover that introducing a Y239H mutation on KKH-SaCas9’s REC domain substantially reduces off-target edits while retaining high on-target activity when added to a set of mutations on REC and RuvC domains that lessen its interactions with the target DNA strand. The Y239H mutation is modelled to have removed an interaction from the REC domain with the guide RNA backbone in the guide RNA-DNA heteroduplex structure. We further confirmed the greatly improved genome-wide editing accuracy and single-base mismatch discrimination of our engineered variants, named KKH-SaCas9-SAV1 and SAV2, in human cells. In addition to generating broadly useful KKH-SaCas9 variants with unprecedented accuracy, our findings demonstrate the feasibility for multi-domain combinatorial mutagenesis on SaCas9’s DNA- and guide RNA- interacting residues to optimize its editing fidelity.
最长约 10秒,即可获得该文献文件

科研通智能强力驱动
Strongly Powered by AbleSci AI
科研通是完全免费的文献互助平台,具备全网最快的应助速度,最高的求助完成率。 对每一个文献求助,科研通都将尽心尽力,给求助人一个满意的交代。
实时播报
少女徐必成完成签到 ,获得积分10
9秒前
15秒前
20秒前
miaolingcool发布了新的文献求助10
21秒前
22秒前
醉熏的千柳完成签到 ,获得积分10
24秒前
zx完成签到 ,获得积分10
25秒前
miaolingcool完成签到,获得积分10
26秒前
xz完成签到 ,获得积分10
27秒前
栗子完成签到 ,获得积分10
31秒前
gmc完成签到 ,获得积分10
36秒前
栗子完成签到 ,获得积分10
38秒前
科研通AI2S应助bai采纳,获得10
42秒前
TOJNRU完成签到,获得积分10
43秒前
风中琦完成签到 ,获得积分10
44秒前
汉堡包应助TOJNRU采纳,获得10
54秒前
1分钟前
蔡勇强完成签到 ,获得积分10
1分钟前
plant完成签到 ,获得积分10
1分钟前
hyxu678完成签到,获得积分10
1分钟前
嘟嘟52edm完成签到 ,获得积分10
1分钟前
qqaeao完成签到,获得积分10
1分钟前
赵勇完成签到 ,获得积分10
1分钟前
航行天下完成签到 ,获得积分10
1分钟前
孤独剑完成签到 ,获得积分10
1分钟前
米共完成签到 ,获得积分10
1分钟前
xue112完成签到 ,获得积分10
1分钟前
miracle完成签到 ,获得积分10
1分钟前
乐正怡完成签到 ,获得积分0
1分钟前
1分钟前
李志全完成签到 ,获得积分10
1分钟前
misstwo完成签到,获得积分10
1分钟前
czj完成签到 ,获得积分10
1分钟前
Owen应助简单采纳,获得10
1分钟前
2分钟前
神勇的晟睿完成签到 ,获得积分10
2分钟前
大方忆秋完成签到 ,获得积分10
2分钟前
JONG应助聪慧芷巧采纳,获得10
2分钟前
jojo完成签到 ,获得积分10
2分钟前
美满的小蘑菇完成签到 ,获得积分10
2分钟前
高分求助中
Les Mantodea de Guyane Insecta, Polyneoptera 2500
Mobilization, center-periphery structures and nation-building 600
Technologies supporting mass customization of apparel: A pilot project 600
Introduction to Strong Mixing Conditions Volumes 1-3 500
China—Art—Modernity: A Critical Introduction to Chinese Visual Expression from the Beginning of the Twentieth Century to the Present Day 430
Multichannel rotary joints-How they work 400
A Field Guide to the Amphibians and Reptiles of Madagascar - Frank Glaw and Miguel Vences - 3rd Edition 400
热门求助领域 (近24小时)
化学 材料科学 医学 生物 工程类 有机化学 物理 生物化学 纳米技术 计算机科学 化学工程 内科学 复合材料 物理化学 电极 遗传学 量子力学 基因 冶金 催化作用
热门帖子
关注 科研通微信公众号,转发送积分 3795624
求助须知:如何正确求助?哪些是违规求助? 3340681
关于积分的说明 10300956
捐赠科研通 3057185
什么是DOI,文献DOI怎么找? 1677539
邀请新用户注册赠送积分活动 805449
科研通“疑难数据库(出版商)”最低求助积分说明 762626