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茶艺大师づ

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5005 积分 2022-02-11 加入

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除了拖尾，你的目的带位置应该正确吧，那么PCR结果还不是太郁闷啊！关键是去掉非特异扩增。有以下几个建议供参考： 1.此次电泳明显上样量太多，可适当减少，易于观察。 2.你上样时一个泳道换一个枪头还是用一个枪头，如果是后者，尽量多吹吸几次，感觉好像有污染（不一定是）。 3.每个PCR体系中有蛋白污染的可能吗？因为有的泳道好像有东西没跑下来，由于蛋白和核酸的作用力可导致拖带。 4.PCR的退火温度适当可以提高一些以减少引物和模板的非特异结合。 5.减少PCR体系的模板量。 6.用热启动PCR试试。 7.体系中加些减少非特异结合的试剂。我们实验室用的是胶体金，效果很好。另外，那个DMSO主要是阻止核酸形成二级结构的，如发卡等，如果PCR产物目的带前面距离很近的位置有较强的带，有可能是模板二级结构的影响，加DMSO可能消除，但我们做过，效果不是很好，目的带和其前面的带都变弱了，怀疑其抑制了酶的活性，反而加甜菜碱（作用同DMSO）的效果好。不过，看楼主的PCR产物这个问题可以先不考虑：）祝你好运！ 4年前

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