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茶艺大师づ
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2022-02-11 加入
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除了拖尾,你的目的带位置应该正确吧,那么PCR结果还不是太郁闷啊!关键是去掉非特异扩增。有以下几个建议供参考: 1.此次电泳明显上样量太多,可适当减少,易于观察。 2.你上样时一个泳道换一个枪头还是用一个枪头,如果是后者,尽量多吹吸几次,感觉好像有污染(不一定是)。 3.每个PCR体系中有蛋白污染的可能吗?因为有的泳道好像有东西没跑下来,由于蛋白和核酸的作用力可导致拖带。 4.PCR的退火温度适当可以提高一些以减少引物和模板的非特异结合。 5.减少PCR体系的模板量。 6.用热启动PCR试试。 7.体系中加些减少非特异结合的试剂。我们实验室用的是胶体金,效果很好。 另外,那个DMSO主要是阻止核酸形成二级结构的,如发卡等,如果PCR产物目的带前面距离很近的位置有较强的带,有可能是模板二级结构的影响,加DMSO可能消除,但我们做过,效果不是很好,目的带和其前面的带都变弱了,怀疑其抑制了酶的活性,反而加甜菜碱(作用同DMSO)的效果好。不过,看楼主的PCR产物这个问题可以先不考虑:) 祝你好运!
3年前