PCR电泳挂带,胶图很奇怪,有没有大佬帮我分析下

综合讨论 7989 2 1
白衣如初
白衣如初 发表于:2022-03-03 18:10:41

PCR电泳跑的胶图,出现这种挂孔,条带很奇怪,电泳液更换过了,能换的都换新的了,marker没有问题,排出胶的问题,中间更换了一次loading条带正常了,但是不久又出现了这种问题 ,loading别人用就没有问题。


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回帖
  • 肥皂剧
    椅子
    肥皂剧 2022-03-27 19:53:37
    排除过核酸染料的问题了吗
  • 茶艺大师づ
    沙发
    茶艺大师づ 5 2022-03-07 16:01:17
    除了拖尾,你的目的带位置应该正确吧,那么PCR结果还不是太郁闷啊!关键是去掉非特异扩增。有以下几个建议供参考:
    1.此次电泳明显上样量太多,可适当减少,易于观察。
    2.你上样时一个泳道换一个枪头还是用一个枪头,如果是后者,尽量多吹吸几次,感觉好像有污染(不一定是)。
    3.每个PCR体系中有蛋白污染的可能吗?因为有的泳道好像有东西没跑下来,由于蛋白和核酸的作用力可导致拖带。
    4.PCR的退火温度适当可以提高一些以减少引物和模板的非特异结合。
    5.减少PCR体系的模板量。
    6.用热启动PCR试试。
    7.体系中加些减少非特异结合的试剂。我们实验室用的是胶体金,效果很好。
    另外,那个DMSO主要是阻止核酸形成二级结构的,如发卡等,如果PCR产物目的带前面距离很近的位置有较强的带,有可能是模板二级结构的影响,加DMSO可能消除,但我们做过,效果不是很好,目的带和其前面的带都变弱了,怀疑其抑制了酶的活性,反而加甜菜碱(作用同DMSO)的效果好。不过,看楼主的PCR产物这个问题可以先不考虑:)
    祝你好运!
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