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[求助补充材料] 利用α-突触核蛋白预制纤维作用于分化的SH-SY5Y细胞 建立帕金森病细胞模型
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探讨利用α-突触核蛋白预形成纤维 （α-Syn PFF） 作用于视黄酸 （RA） 分化的SH-SY5Y细胞建立帕金森病细胞模 型的可行性。方法 将SH-SY5Y细胞随机分为未分化组和RA分化组，Western blotting检测酪氨酸羟化酶 （TH）、多巴胺转运蛋 白 （DAT）、淋巴细胞活化基因 3蛋白 （LAG3）、巢蛋白 （Nestin） 表达水平，免疫荧光染色检测微管相关蛋白2 （MAP2）、神经元特异 核蛋白 （NeuN） 表达情况。将经RA分化后的SH-SY5Y细胞随机分为control组和α-Syn PFF组，Hoechst 33342染色检测细胞核固 缩情况，一氧化氮 （NO） 含量检测试剂盒测定细胞内NO生成量，Western blotting检测TH、多聚腺苷酸二磷酸 （PAR）、多聚腺苷酸 二磷酸核糖酶 （PARP） 表达水平，免疫荧光染色检测细胞内129位丝氨酸磷酸化α-突触核蛋白 （pS129-α-Syn） 及磷酸化组蛋白 H2AX （γH2AX） 表达情况。结果 RA处理可诱导SH-SY5Y细胞胞体变小、突起变长。Western blotting结果显示，R A 处理可提高 SH-SY5Y细胞TH、DAT、LAG3表达水平，降低Nestin表达水平 （P < 0.05） ； α-Syn PFF处理可使分化的SH-SY5Y细胞TH蛋白表达 水平降低，PAR、PARP-1、cleaved PARP-1蛋白表达水平升高 （P < 0.05）。免疫荧光染色结果显示，R A 处理能提高SH-SY5Y细胞 MAP2和NeuN表达水平 （P < 0.001） ； α-Syn PFF处理可使分化的SH-SY5Y细胞γH2AX和pS129-α-Syn的表达水平升高 （P < 0.01）。 Hoechst 33342染色结果显示，α-Syn PFF处理可使分化的SH-SY5Y细胞核固缩 （P < 0.001）。NO检测结果显示，α-Syn PFF处理可 提高分化的SH-SY5Y细胞内NO含量 （P < 0.01）。结论 α-Syn PFF作用于RA分化的SH-SY5Y细胞可建立帕金森病细胞模型。 |
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