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<em>Agrobacterium tumefaciens</em> and <em>Agrobacterium rhizogenes</em>-Mediated Transformation of Potato and the Promoter Activity of a Suberin Gene by GUS Staining

农杆菌 转化(遗传学) 生物 根癌农杆菌 报告基因 根瘤菌科 转基因作物 植物 龙葵 格斯报告系统 基因 转基因 基因表达 细菌 遗传学 共生
作者
Sandra Fernández-Piñán,Jennifer López,Iker Armendariz,Pau Boher,Mercè Figueras,Olga Serra
出处
期刊:Journal of Visualized Experiments [MyJOVE]
卷期号: (145) 被引量:6
标识
DOI:10.3791/59119
摘要

Agrobacterium sp. is one of the most widely used methods to obtain transgenic plants as it has the ability to transfer and integrate its own T-DNA into the plant's genome. Here, we present two transformation systems to genetically modify potato (Solanum tuberosum) plants. In A. tumefaciens transformation, leaves are infected, the transformed cells are selected and a new complete transformed plant is regenerated using phytohormones in 18 weeks. In A. rhizogenes transformation, stems are infected by injecting the bacteria with a needle, the new emerged transformed hairy roots are detected using a red fluorescent marker and the non-transformed roots are removed. In 5-6 weeks, the resulting plant is a composite of a wild type shoot with fully developed transformed hairy roots. To increase the biomass, the transformed hairy roots can be excised and self-propagated. We applied both Agrobacterium-mediated transformation methods to obtain roots expressing the GUS reporter gene driven by a suberin biosynthetic gene promoter. The GUS staining procedure is provided and allows the cell localization of the promoter induction. In both methods, the transformed potato roots showed GUS staining in the suberized endodermis and exodermis, and additionally, in A. rhizogenes transformed roots the GUS activity was also detected in the emergence of lateral roots. These results suggest that A. rhizogenes can be a fast alternative tool to study the genes that are expressed in roots.

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