PKC-α、δ亚型在AVP改善缺氧处理VSMC反应性中的作用及其与MLC20磷酸化调节的关系

目的：探讨蛋白激酶C（PKC）-α、δ亚型在精氨酸血管加压素（AVP）改善缺氧处理血管平滑肌细胞（VSMC）反应性中的作用及其与肌球蛋白轻链（MLC20）磷酸化、肌球蛋白轻链激酶（MLCK）和肌球蛋白轻链磷酸酶（MLCP）的关系。方法：贴块法取大鼠肠系膜上动脉（SMA）血管平滑肌细胞原代培养并传代至第3—5代后用于实验，观察缺氧1．5h后PKC-α、δ亚型抑制剂处理对AVP调节VSMC收缩反应性的影响，以荧光素标记的牛血清白蛋白在Transwell小室中的渗透率变化反映VSMC的收缩反应性；用酶反应法测定缺氧VSMCMLCK／MLCP活性。同时取失血性休克大鼠（30mmHg，2h）SMA，观察PKC-α、δ亚型在AVP调节休克血管MLC20磷酸化水平（Western blotting）中的作用。结果：PKC-α抑制剂G66976预处理可明显抑制AVP引起的缺氧VSMC收缩反应的升高，而PKC-δ抑制剂rottlerin也部分抑制AVP的作用。缺氧VSMC的MLCP活性明显升高、MLCK活性降低，同时休克血管平滑肌的MLC20磷酸化水平降低；AVP预处理可使缺氧VSMCMLCP活性降低、MLC。磷酸化水平升高，而Go 6976可明显拈抗AVP的作用，rottlerin仅有轻度的抑制作用。AVP和PKC-α、δ抑制剂对MLCK活性的变化无明显影响。结论：AVP通过调节血管平滑肌细胞MLCP活性和MLC。磷酸化水平来恢复休克后血管反应性和钙敏感性，PKC-α是其中重要的调节分子。