Heterologous Expression and Purification of a CRISPR-Cas9-Based Adenine Base Editor

引导RNA 清脆的 Cas9 质粒 核糖核蛋白 计算生物学 异源的 DNA 碱基对 生物 基因组编辑 基因组DNA 分子生物学 核糖核酸 基因 遗传学
作者
Seu-Na Lee,Hong-Su Jang,Jae Sung Woo
出处
期刊:Methods in molecular biology [Springer Science+Business Media]
卷期号:: 123-133 被引量:1
标识
DOI:10.1007/978-1-0716-2879-9_10
摘要

CRISPR-cas9-guided adenine base editors (ABEs) site-specifically convert the A-T base pair to G-C base pair in genomic DNA. The intracellular delivery of ABE proteins preassembled with guide RNAs (gRNAs) has shown greatly reduced off-target effects compared with that of plasmids or viral vectors containing ABE and gRNA-encoding sequences. For efficient gene editing by the ribonucleoprotein delivery method, the ABE-gRNA complexes need to be prepared in high purity and quantity. Here we describe the expression and purification procedure of ABEmax, one of high-efficiency ABE versions.
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