Rab7 GTPase负向调节巨噬细胞中poly I:C诱导的细胞因子的表达

目的：通过构建Rab7的失活突变载体tRab7（Rab7T22N）,研究Rab7失活突变后对poly I：C诱导的RAW264.7巨噬细胞中细胞因子的影响。方法：利用PCR定点突变法构建Rab7的失活突变载体Rab7T22N,将Rab7的真核表达载体及其突变体tRab7通过脂质体法瞬时转染RAW264.7细胞,通过Western blot方法检测Rab7的表达情况。poly I：C刺激转染细胞不同时间后检测细胞因子IFN-β、IP10、TNF-α和IL-1β的表达变化。结果：Western blot检测结果显示,与转染空质粒的对照细胞相比,转染Rab7和tRab7的细胞中Rab7的蛋白水平显著增高。Rab7过表达后,抑制了巨噬细胞RAW264.7中poly I：C刺激后IFN-β、IP10、TNF-α和IL-1β的产生,而Rab7失活突变体tRab7（Rab7T22N）过表达后显著促进了IFN-β、IP10、TNF-α和IL-1β的表达。结论：Rab7抑制了poly I：C刺激的巨噬细胞中IFN-β、IP10、TNF-α和IL-1β的表达,该抑制作用依赖于其GTP结合活性。本研究为进一步阐明Rab7在TLR3信号转导通路中的作用奠定了基础。