구연 : HBsAg이 소실된 환자의 간조직내 B형 간염 바이러스 염기서열 분석 및 임상적 의의

배경/목적: 과거에는 B형 간염바이러스의 표면항원(HBsAg)의 소실이 HBV 감염으로부터의 회복을 의미해 왔으나 최근 분자생물학적 진단 방법의 발달로 인하여 적은 양이지만 HBV DNA가 간을 비롯한 체내에 존재한다는 것이 확인 되었다. 하지만 그 기전에 대해서는 아직까지 불분명한 상태이므로 본 연자 등은 추적 관찰 중 HBsAg이 소실된 환자들의 조직을 분자 생물학적 실험을 통해 분석하였다. 대상과 방법: 총 430명의 만성 HBsAg 보유자로부터 항원이 소실된 22명의 간조직을 얻어 분석하였고 이중 3명은 항원 소실 전후의 조직을 얻을 수 있었다. 22명중 2명은 인터페론을, 1명은 라미부딘을 치료 받았었다. 모든 간조직에서 HBV DNA를 추출하여 major hydrophilic region(MHR)과 HBsAg부위를 control vector에 cloning하였다. 자동염기서열분석법으로 S gene의 돌연변이와 아형을 확인하고 HepG2 cell에 transfection시킨 후 in vitro transcription/translation을 통한 HBsAg의 정량적 분석과 ELISA를 이용한 HBsAg/anti-HBs binding assay를 시행하였다. 또한 PCR방법을 통해 core promoter/precore 변이를 알아보았다. Real-time PCR은 HBV의 replicative form인 cccDNA의 정량을 위하여 시행되었다. 결과: Real-time PCR 결과 모든 조직에서 HBV의 cccDNA가 검출되어 혈청 내에서 HBsAg이 검출 되지 않는다 해도 간 조직에는 바이러스의 복제가 미약하나마 이루어지고 있다는 것을 알 수 있었다. MHR의 염기서열분석에서 T123S, M123I/N, I126L,C139R 그리고 D144E 변이가 6명에서 발견되었는데 특히 C139R 또는 D144E의 변이를 가진 군은 간세포내에 cccDNA가 많이 존재함에도 불구하고 낮은 항원성을 나타내었는데 이는 a-determinant 돌연변이로 인한 anti-HBs와 결합력 감소에 의한 것으로 보였다. 인터페론을 투여한 환자 중 한명은 225번의 아미노산인 티로신의 결손으로 HBsAg의 세포질내로 배출이 감소되어 HBsAg 검출이 안 되었음을 확인하였다. 라미부딘 투여 환자에서는 간세포에서 낮은 양의 cccDNA가 검출되어 실제로 HBsAg분비가 거의 소실 되었음을 알 수 있었다. Core promoter의 전사 인자 결합 부위에 A1762T와 G1764A변이는 혈청 HBeAg감소와 세포내 cccDNA감소와 동반되었는데 HBsAg소실과는 연관성이 없었다. 흥미롭게도 HBV 아형의 분석결과 HBsAg소실 환자들의 대부분이 ayw형 이었고 우리나라에서 흔한 adr형은 관찰되지 않았다. 결론: 만성 B형 간염 환자에서 HBsAg이 소실된 경우, HBV의 복제능 상실 외에도 돌연변이에 의한 HBsAg 항원성의 변화, HBsAg의 세포질내로 분비 장애가 항원 검출에 영향을 줄 수 있음을 확인하였다.