Protective effects of isorhamnetin against H2O2-induced mitochondrial structural and functional damage in HaCaT cells

摘要： 【摘要】 目的 探究异鼠李素对氧化应激状态下HaCaT细胞线粒体结构及功能的保护作用。方法 以HaCaT细胞为研究对象，实验分为4组：对照组（常规培养HaCaT细胞）、异鼠李素组（仅加入60 μmol/L异鼠李素处理）、H2O2组（仅加入600 μmol/L H2O2处理）、异鼠李素 + H2O2组（加入60 μmol/L异鼠李素预处理12 h后换液加入600 μmol/L H2O2处理12 h）。采用流式细胞仪检测细胞活性氧（ROS）水平，电镜观察线粒体超微结构，共聚焦荧光显微镜观察线粒体膜电位，ATP检测试剂盒检测线粒体ATP含量，实时荧光定量PCR（qRT-PCR）测定线粒体DNA拷贝数。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。结果 HaCaT细胞经H2O2处理后呈氧化应激状态，H2O2组细胞内ROS水平（10 725.0 ± 845.8）显著高于对照组（1 708.0 ± 69.4，t = 18.4，P＜0.001），线粒体膜电位荧光强度、ATP含量、线粒体DNA特征性基因ND-1表达量均显著低于对照组（t值分别为4.58、4.48、6.11，P值分别为0.01、0.01、0.003）。异鼠李素预处理后，异鼠李素 + H2O2组ROS水平（7 640.0 ± 922.7）显著低于H2O2组（t = 4.27，P = 0.013），线粒体膜电位荧光强度、ATP含量、线粒体DNA ND-1基因表达量均显著高于H2O2组（t值分别为4.59、4.58、5.61，P值分别为0.01、0.01、0.005）。电镜下，异鼠李素 + H2O2组线粒体结构较H2O2组清晰、完整，线粒体嵴无肿胀或轻度肿胀，未见线粒体空泡化；可见自噬小体吞噬受损的线粒体。结论 异鼠李素可能通过诱导自噬降低ROS水平，对H2O2诱导的HaCaT细胞线粒体结构及功能损伤有保护作用。