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A transposon system for random insertion of a gene expression cassette into the chromosome of Bacillus subtilis

表情盒 转座因子 生物 转座酶 遗传学 枯草芽孢杆菌 基因 质粒 换位(逻辑) 基因盒 分子生物学 重组DNA 突变体 整合子 语言学 载体(分子生物学) 哲学 细菌
作者
Bin Ye,Tao Qing,Xin Yan
出处
期刊:Journal of Biotechnology [Elsevier BV]
卷期号:361: 66-73 被引量:4
标识
DOI:10.1016/j.jbiotec.2022.11.020
摘要

Bacillus subtilis is a robust industrial workhorse for the production of heterologous proteins. Chromosomal integration-based protein production has advantages over plasmid-based methods. Considering that the expression level of a gene is affected by its location in the chromosome, it is important to find an optimal integration site for the gene to be expressed. This work establishes a method for random insertion of a gene expression cassette into chromosomes, enabling the screening of optimal integration sites for high-level protein production. Specifically, a gene expression cassette and a chloromycetin-resistance marker are assembled into a transposon. This transposon is inserted between the promoter and the ribosomal binding site of the zeocin-resistance marker in the chromosome, which blocks the transcription of the zeocin-resistance gene. Transposase Himar1-mediated transposition of this transposon activates the zeocin-resistance marker, which can be selected on plates containing both chloromycetin and zeocin. The transposition frequency was over 10−5. This method was used to select proper insertion sites for the expression cassette of methyl parathion hydrolase (MPH). Compared with the common integration site amyE, the expression level of MPH was increased up to 50 % at the yjbH site.
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