Triptolide induces apoptosis of human melanoma A375 cells through the inositol-requiring enzyme 1/c-Jun N-terminal kinase signaling pathway

摘要： 【摘要】 目的 探讨雷公藤甲素（TP）通过肌醇需求酶1（IRE1）/c-Jun氨基端激酶（JNK）信号通路对人黑素瘤A375细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法 采用不同浓度［0（实验对照组）、50、100、200 nmol/L］TP处理A375细胞，同时设置空白对照组（仅有DMEM高糖培养基，不含细胞），采用噻唑蓝（MTT）比色法测定处理24、48和72 h时细胞活性，流式细胞仪检测处理24 h时细胞凋亡率，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和Western印迹法检测IRE1、JNK和c-Jun mRNA及蛋白表达水平。经JNK抑制剂SP600125预处理A375细胞72 h后，再用100 nmol/L TP处理24 h，即SP600125 + 100 nmol/L TP组，观察TP对A375细胞中IRE1、JNK、c-Jun mRNA表达水平及细胞凋亡的影响。统计分析采用两因素方差分析、单因素方差分析及Dunnett-t检验。结果 不同浓度TP作用不同时间，各浓度TP组A375细胞存活率均显著低于实验对照组（FTP浓度 = 18.36，P = 0.002），且随时间延长，A375细胞存活率越低（F时间 = 8.54，P = 0.018）。处理A375细胞24 h，50、100、200 nmol/L TP组及实验对照组细胞凋亡率分别为16.99% ± 0.33%、30.78% ± 0.40%、38.91% ± 0.51%、4.33% ± 0.02%，组间差异有统计学意义（F = 5 234.97，P < 0.001），各TP组细胞凋亡率均显著高于实验对照组（均P < 0.05），且凋亡率随TP浓度的增加而逐渐升高。50、100、200 nmol/L TP组IRE1、JNK和c-Jun mRNA表达水平均显著高于实验对照组（均P < 0.05），且随着TP浓度的增加这些基因mRNA表达水平逐渐升高，TP处理组A375细胞中IRE1、JNK、c-Jun、p-JNK和p-c-Jun蛋白表达水平也显示出相同的趋势。经JNK抑制剂SP600125预处理72 h后，SP600125 + 100 nmol/L TP组细胞凋亡率（21.88% ± 0.55%）显著低于未经SP600125预处理的100 nmol/L TP组（t = -22.51，P < 0.001），且IRE1、JNK和c-Jun mRNA的表达水平也显著降低（均P < 0.05）。结论 TP可能通过激活IRE1/JNK信号通路诱导人黑素瘤A375细胞凋亡。