Protective effect of human amniotic membrane extract against hydrogen peroxide‐induced oxidative damage in human dermal fibroblasts

One of the main approaches to preventing skin ageing is to protect fibroblast cells from oxidative stress. The promoting effect of the human amniotic membrane extract (hAME) on re-epithelization, proliferation and migration of cells in wound healing has been already well studied. This experimental study aimed to investigate the antioxidant activity of hAME against hydrogen peroxide (H2 O2 )-induced dermal fibroblast damage.Here, to establish the ageing model, human foreskin fibroblasts (HFFs) were exposed to 200 μM H2 O2 for 2 h. HFFs were treated with 0.1 mg/ml AME for 24 or 48 h before or/and after H2 O2 exposure. A total of 48 h following the H2 O2 treatment, we measured cell proliferation, viability, senescence-associated β-galactosidase (SA-β-Gal), antioxidants and preinflammatory cytokine (IL-6) levels, as well as the expression of senescence-associated genes (P53 and P21).The obtained results indicated that under oxidative stress, AME significantly increased cellular viability and not only promoted the cell proliferation rate but also attenuated apoptotic induction condition (p < 0.001). AME also significantly reversed the SA-β-Gal levels induced by H2 O2 (p < 0.001). Additionally, both pre- and post-treatment regimen by AME down-regulated the expression of senescence marker genes (p < 0.001). Moreover, AME declined different oxidative stress biomarkers such as superoxide dismutase and catalase and increased the glutathione amount.Altogether, our results indicated that AME had a remarkable antioxidant and antiageing activity as pre- and post-treatment regimen, pointing to this compound as a potential natural-based cosmeceutical agent to prevent and treat skin ageing conditions.محافظت از سلول‌های فیبروبلاست در برابر استرس اکسیداتیو یکی از روش‌های اصلی جلوگیری از پیری پوست است. این مطالعه تجربی، با هدف بررسی فعالیت آنتی‌اکسیدانی عصاره غشای آمنیوتیک انسانی (hAME) در برابر آسیب ناشی از پراکسید هیدروژن (H2 O2 )، در سلول‌های فیبروبلاست انسانی انجام شد. در اینجا، برای ایجاد مدل پیری، فیبروبلاست‌های پوست ختنه‌گاه انسانی (HFFs) به مدت 2 ساعت در معرض μM200 H2 O2 قرار‌گرفتند. HFFها با mg/ml 0.1 AME به مدت 24 یا 48 ساعت قبل یا/و بعد از قرار گرفتن در معرض H2O2 تحت درمان قرار گرفتند. در مجموع، 48 ساعت پس از تیمار H2 O2 ، تکثیر سلولی، زنده‌مانی و فعالیت بتا-گالاکتوزیداز (SA-β-Gal)، میزان آنتی اکسیدان‌ها و سیتوکین‌های پیش التهابی (IL-6) و همچنین بیان ژن‌های مرتبط با پیری (P53 و P21) اندازه‌گیری شد. نتایج نشان داد که تحت استرس اکسیداتیو، AME به طور قابل ‌توجهی زنده‌مانی سلولی را افزایش می‌دهد و نه تنها سرعت تکثیر سلولی را بهبود می‌بخشد، بلکه میزان آپاپتوز را نیز کاهش می‌دهد (p < 0.001). هم‌چنین، AME، به طور قابل توجهی فعالیت SA-β-Gal که تحت اثر H2 O2 افزایش یافته ‌بود را کاهش داد (p < 0.001). علاوه بر این، تیمار با AME، قبل و بعد از استرس اکسیداتیو، از بیان ژن‌های نشانگر پیری جلوگیری کرد (p < 0.001). AME، بیان بیومارکرهای مختلف استرس اکسیداتیو مانند سوپر اکسید دیسموتاز و کاتالاز را نیز کاهش داد و برعکس مقدار گلوتاتیون را افزایش داد. در مجموع، نتایج ما نشان داد که AME فعالیت آنتی اکسیدانی و ضد پیری قابل توجهی قبل و بعد از استرس اکسیداتیو دارد؛ که به این نکته اشاره دارد که به منظور پیشگیری و یا درمان پیری پوست، AME می‌تواند به عنوان یک ماده طبیعی در ترکیب مواد آرایشی استفاده شود.