The effect of hydro alcoholic extract of Nigella sativa seeds on inflammatory mediators in C6 glioma cell line

Inflammation, IL-6, IL-10, TNF-α, TGF-β1, Glioblastoma, Nigella sativa seeds. Subject: Nigella sativa ( N. sativa ) is a highly valued nutritional plant, which has long been used in traditional medicine to treat a variety of human diseases. The multifaceted pharmacological impacts of N. sativa, such as attenuating oxidative stress and inflammation, make it a suitable therapeutic candidate against cardiovascular, hepatic, and neurological disorders as well as cancer. Therefore, the current study aimed to evaluate the effect of the hydroalcoholic extract of N.sativa seeds on several pro-inflammatory cytokines in the C6 glioma cell line and to compare it with the effect of the extract on the normal fibroblast cell line. Methods : C6 and fibroblast cell lines were treated with the extract of N.sativa seeds, and 3‐(4, 5‐dimethylthiazol‐2‐yl)‐2, 5‐diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay was performed to determine the half-maximal inhibitory concentration (IC50) after 72 h of treatment. Real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) was carried out to assess the expression levels of interleukin (IL)-6, IL-10, tumor necrosis factor-alpha (TNF-α), and transforming growth factor- β1 (TGF-β1) at the mRNA level in both cell lines after 72 h of treatment with non-toxic and IC50 concentrations obtained from C6 cell line. Results : The IC50 values for the hydroalcoholic extract of N.sativa seeds were 260 ± 20 μg/mL in the C6 cell line and 398 ± 27 μg/mL in fibroblast cells. The real-time PCR results indicated that the treatment of C6 and fibroblast cells with the extract at the IC50 value of N.sativa in C6 for 72 h could increase the mRNA expression levels of IL-10 and reduce the mRNA expression levels of IL-6, TNF-α, and TGF-β1 in C6 and fibroblast cells. The N.sativa extract showed a higher anti-inflammatory effect on C6 cells in comparison with fibroblast cells. Conclusions : Regarding the anti-inflammatory effect of Nigella sativa in C6 cell line, it may be considered a promising candidate to fortify antitumor actions in combination with other therapeutic options in the treatment of patients with GBM. Objet: Nigella sativa ( N. sativa ) est une plante nutritionnelle très appréciée, utilisée depuis longtemps en médecine traditionnelle pour traiter diverses maladies humaines. Les impacts pharmacologiques multiformes de N. sativa , tels que l'atténuation du stress oxydatif et de l'inflammation, en font un candidat thérapeutique approprié contre les troubles cardiovasculaires, hépatiques et neurologiques ainsi que contre le cancer. Par conséquent, la présente étude visait à évaluer l'effet de l'extrait hydroalcoolique de graines de N. sativa sur plusieurs cytokines pro-inflammatoires dans la lignée cellulaire du gliome C6 et à le comparer à l'effet de l'extrait sur la lignée cellulaire normale de fibroblastes. Méthodes : Les lignées cellulaires C6 et fibroblastes ont été traitées avec l'extrait de graines de N.sativa , et le dosage du bromure de 3-(4, 5-diméthylthiazol-2-yl)-2, 5-diphényltétrazolium (MTT) a été effectué pour déterminer la demi- concentration maximale inhibitrice (CI50) après 72 h de traitement. Une réaction en chaîne par polymérase en temps réel (RT-PCR) a été réalisée pour évaluer les niveaux d'expression de l'interleukine (IL)-6, de l'IL-10, du facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-α) et du facteur de croissance transformant β1 (TGF -β1) au niveau de l'ARNm dans les deux lignées cellulaires après 72 h de traitement avec des concentrations non toxiques et IC50 obtenues à partir de la lignée cellulaire C6. Résultats : Les valeurs d'IC50 pour l'extrait hydroalcoolique de graines de N.sativa étaient de 260 ± 20 μg/mL dans la lignée cellulaire C6 et de 398 ± 27 μg/mL dans les fibroblastes. Les résultats de la PCR en temps réel ont indiqué que le traitement des cellules C6 et fibroblastes avec l'extrait à la valeur IC50 de N. sativa dans C6 pendant 72 h pourrait augmenter les niveaux d'expression de l'ARNm de l'IL-10 et réduire les niveaux d'expression de l'ARNm de l'IL- 6, TNF-α et TGF-β1 dans les cellules C6 et fibroblastes. L'extrait de N.sativa a montré un effet anti-inflammatoire plus élevé sur les cellules C6 par rapport aux cellules fibroblastes. Conclusions : En ce qui concerne l'effet anti-inflammatoire de Nigella sativa dans la lignée cellulaire C6, elle peut être considérée comme un candidat prometteur pour renforcer les actions antitumorales en combinaison avec d'autres options thérapeutiques dans le traitement des patients atteints de GBM.