Isolation of RNA and DNA from Single Preimplantation Embryos and a Small Number of Mammalian Oocytes for Imprinting Studies

核酸 胚胎 生物 溶解 RNA提取 互补DNA 核糖核酸 DNA DNA甲基化 细胞生物学 分子生物学 生物化学 基因表达 基因
作者
Sarah Rose Huffman,Md Almamun,Rocío Melissa Rivera
出处
期刊:Methods in molecular biology [Springer Science+Business Media]
卷期号:925: 201-209 被引量:6
标识
DOI:10.1007/978-1-62703-011-3_13
摘要

Researchers whose experimental models are mammalian oocytes and preimplantation embryos are often limited by the yield of nucleic acids that can be isolated from such a small sample size. In addition, the limited number of cells from these types of samples makes the simultaneous recovery of RNA and DNA very difficult and often sample pooling is necessary to increase nucleic acid yield. Here we report a simple set of procedures using commercially available kits that results in consistent yield and quality of nucleic acids. After sample lysis, RNA is isolated and converted to a reusable cDNA library. Following RNA isolation, DNA is precipitated, isolated, and bisulfite converted for DNA methylation studies. Our results demonstrate the feasibility of isolating RNA and DNA from a small number of cells with repeatability of results.
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