The effect of actinomycin D on RNA and protein synthesis during differentiation of myoblasts of line L6E : the half-life of functional myosin messenger

The sedimentation pattern of cytoplasmic poly A containing mRNAs of differentiating myoblasts of Line L6E have been investigated. Many rapidly sedimenting mRNAs species (30 S, 29 S, 26 S), amongst which the messenger for myosin should be sought, have found to be synthesized by differentiated as well as non differentiated myoblast cultures, but for 29 S species. Other distinct mRNA peaks, which could code for phosphorylase, glycogen synthetase, actin and tropomyosin, beside « house keepingproteins, have also been observed. The relative rate of synthesis of these high molecular weight mRNAs increases twofold during differentiation. Actinomycin D at low doses (0.05 to 0.1 μg/ml) inhibits the synthesis of most poly A containing cytoplasmic mRNAs. The half life functional myosin mRNA, as determined by the decay of myosin synthetising capacity of the cultures after addition of high (10 μg/ml) and low (0.1 μg/ml) doses of actinomycin has been found to be constant at the begninning and during differentiation, decreasing considerably when morphological differentiation is completed, while the decay of the bulk of the protein synthesizing capacities remains constant. Nous avons étudié les profils de sédimentation de zone des RNAs cytoplasmiques contenant des séquences poly A au cours de la différenciation des myoblastes de la ligne L6E. Plusieurs pics de mRNA ayant une haute constante de sédimentation (30 S, 29 S, 26 S), parmi lesquels le RNA messager de la myosine devrait se trouver, ont été observés dans des extraits de myoblastes en cours de différenciation. Le taux relatif de synthèse des mRNAs de haut poids moléculaire augmente au plus de 2 fois au cours de la différenciation. D'autres pics de mRNA, qui pourraient coder pour la phosphorylase, la glycogène synthétase, l'actine et la tropomyiosine ont également été observées. L'addition d'actinomycine à faible dose (0,05 à 0,1 g/ml) inhibe complètement la synthèse de presque tous les RNA cytoplasmiques contenant du poly A. La demi-vie du messager fonctionnel de la myosine a été déterminée en étudiant la décroissance de la capacité des cellules à synthétiser la myosine après arrêt de la synthèse des RNA par de fortes (10 μg/ml) et des faibles doses (0,1 μg/ml) d'actinomycine D. Cette demi-vie est constante au début et au cours de la différenciation des cellules, diminuant considérablement en fin de différenciation, alors que la demi-vie de l'ensemble des messagers fonctionnels des cultures reste constant tout au long de la période étudiée. Wir haben die Zonensedimentationsprofile der Zytoplasmus-RNA, welche Poly A-Sequenzen enthalten, im Laufe der Differenzierung der Myoblasten der L6E-Stammlinie untersucht. Verschiedene Pike mit einer hohen Sedimentationskonstante (30 S, 26 S 24 S), unter denen die Messenger-RNA des Myosins sich befinden sollte, sind in Myelosblastenextrakten im Laufe der Differenzierung gefunden worden. Die relative Synthesegeschwindigkeit nimmt nicht mehr als 2 Mal im Laufe der Differenzierung zu. Andere mRNA-Pike, welche die Code der Phosphorylase, der Glycogensynthetase, des Actins, und des Tropomyosins enthalten könnten, sind ebenfalls beobachtet worden. Das Hinzufügen von Actinomysosin in schwachen Mengen (0,05 bis 0,1 g/ml) hemmt vollständig die Synthese fast aller Poly A enthaltenden Zytoplasmen-RNA. Die halbe Lebensperiode des funktionellen Myosinmessengers ist bestimmt worden, indem man das Abnehmen der Fähigkeit der Zellen für die Myosinsynthese nach Aufhören der RNA-Synthese durch starke (10 μg/ml) und schwache (0,1 μg/ml Dosen von Actinomycin D untersuchte. Diese halbe Lebensperiode ist konstant am Anfang und im Laufe der Zelldifferenzierung und nimmt am Ende der Differenzierung beträchtlich ab, während die halbe Lebensperiode der gesamten funktionellen Messenger der Kulturen während der ganzen untersuchten Periode konstant bleibt.