Co-immunofluorescence of MRPL12 and Nrf2 in HK2 Cells

Immunofluorescence is a technique to visualize the localization of specific molecule targets within cells using the specificity of antibodies. Here, we describe a protocol to detect two different protein components in a cell simultaneously. Antibody concentrations to be used vary from cell to cell and should be optimized for different cell types. In this protocol, we perform co-immunofluorescence of mitochondrial ribosomal protein L7/L12 (MRPL12) and nuclear factor erythroid 2-related factor 2 (Nrf2), a potential transcription factor of MRPL12, in HK-2 cells, as an example. Taking advantage of the diverse set of antibodies raised in different species, we are able to analyze the colocalization and expression of these proteins., [摘要]免疫荧光是一种利用抗体的特异性来可视化细胞内特定分子靶标定位的技术。在这里，我们描述了一种同时检测细胞中两种不同蛋白质成分的协议。待使用的抗体浓度因细胞而异，应针对不同的细胞类型进行优化。在本协议中，我们在 HK-2 细胞中对线粒体核糖体蛋白 L7/L12 (MRPL12) 和核因子红细胞 2 相关因子 2 (Nrf2)（MRPL12 的潜在转录因子）进行共免疫荧光，例如。利用在不同物种中产生的多种抗体，我们能够分析这些蛋白质的共定位和表达。 [背景]的线粒体核糖体蛋白L7 / L12（MRPL12），线粒体核糖体蛋白（MRP）家族的一个成员，起着线粒体功能关键作用，包括线粒体核糖体组装（Surovtsevaa等人，2011;库尔等人。，2016） 、mtDNA 转录（Surovtsevaa等人，2011 年；Nouws等人，2016 年）、线粒体 ATP 生产（Marty 和 Fort，1996 年）和线粒体氧化磷酸化（OXPHOS）（Ma等人，2020 年）。作为协调抗氧化基因表达的经典分子（Hayes 和 Dinkova-Kostova，2014；Dinkova-Kostova 和 Abramov，2015），预计核因子红细胞 2 相关因子 2（Nrf2）是 MRPL12 的潜在转录因子（ Gu等人，2021 年）。为了检查 Nrf2 对 MRPL12 表达的调节，应用共免疫荧光来鉴定两种蛋白质的丰度和共定位。在这里，我们进行了一种间接免疫荧光技术，其中样品细胞与不同物种中产生的一抗一起孵育，这些一抗由荧光团偶联的二抗检测。使用这种共免疫荧光技术，我们可以同时分析蛋白质的分布并进行半定量分析以间接阐明两个分子之间的相互作用。