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 甜叶菊黄酮糖基转移酶挖掘与功能鉴定 |
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DataType: 2 Title-题名: 甜叶菊黄酮糖基转移酶挖掘与功能鉴定 Author-作者:郭晨新; Source-学位授予单位: 大连交通大学 Year-年: 2023 PubTime-发表时间: 2023-06-14 Keyword-关键词: 甜叶菊;糖基化;黄酮;蛋白表达;酶学表征 Summary-摘要: 甜叶菊因其叶片中含有黄酮类化合物,具有抗肿瘤、抑菌等药理活性。糖基化是黄酮类化合物常见的修饰方式,依赖糖基化转移酶的催化,能够改变黄酮类物质的溶解度、稳定性、生物活性和转运特征等性质,还能够进一步增加黄酮类物质的多样性。本研究建立在课题组先前转录组数据分析的基础上克隆、表达并表征候选基因,主要研究内容与结果如下:(1)通过提取甜叶菊叶片中RNA,克隆出黄酮糖基转移酶候选基因SrUGT72B1与SrUGT91D2及其突变序列。对克隆出的序列进行比对分析,生物信息学分析表明,SrUGT72B1与SrUGT91D2均具有UDP-糖基转移酶保守结构域,属于糖基转移酶GTB超家族。(2)将SrUGT72B1构建至pET21a载体中,利用大肠杆菌进行异源表达,通过Ni-NTA及阴离子交换纯化得到目的蛋白,利用HPLC法鉴定SrUGT72B1具有糖基化黄酮类化合物的能力。将SrUGT92D1分别构建至p ET21a、p ET21a/p Gro7及p Cold TF载体中,利用大肠杆菌进行异源表达,利用Ni-NTA亲和层析得到目的蛋白利用HPLC法鉴定SrUGT91D2无活性;(3)对SrUGT72B1进行了生化表征实验,SrUGT72B1的最适p H为9.0,最适温度为50℃,SrUGT72B1具有广泛的受体底物耐受性;最适底物为芹菜素;更偏好选择UDP-Glc作为糖供体。分析LC-MS/MS结果,推测该酶能糖基化黄酮类物质的多个羟基位点。鉴定出SrUGT72B1糖基化槲皮素的主要产物为槲皮素3-O-葡萄糖苷。 Period-期: 11 PageCount-页数: 74 SrcDatabase-来源库: 硕士 Teacher-导师: 车如心;拓亚琴 Degree-学位: 硕士 Organ-大学: 大连交通大学 Link-链接: https://link.cnki.net/doi/10.26990/d.cnki.gsltc.2023.001402 |
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