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坦布苏病毒E蛋白单克隆抗体的制备及其应用研究
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| 其它 | 摘要：为了制备高特异性的抗坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV) E蛋白结构域Ⅲ(EⅢ)的单克隆抗体，试验采用原核表达系统表达重组TMUV-EⅢ蛋白，免疫Balb/c小鼠后，采用杂交瘤技术筛选单克隆抗体，用单克隆抗体亚类鉴定试剂盒测定其亚类，对单克隆抗体的重链和轻链进行测序并预测其互补决定区(complementary determining region,CDR);采用间接免疫荧光法和免疫组织化学法鉴定其特异性及应用性。结果表明:经筛选后获得1株能稳定分泌抗TMUV单克隆抗体的杂交瘤细胞株(7A10D9株)。其重链亚类为Ig G1，可变区基因属IGHV1家族(核苷酸相似性为93.41%);轻链亚类为Igκ，可变区基因属IGKV8家族(核苷酸相似性为96.55%)。间接免疫荧光证实单克隆抗体7A10D9仅与TMUV发生反应，与鸭瘟病毒(Duck enteritis virus,DEV)、番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)及新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)不发生反应。此外，该单克隆抗体成功应用于表达TMUV-E蛋白的重组DEV活载体疫苗E蛋白表达的检测，免疫组织化学法特异性识别TMUV感染鸭、鹅、小鼠组织中TMUV的分布。说明制备的抗TMUV-EⅢ蛋白单克隆抗体具有高特异性和广适性，可用于TMUV的检测、致病机制研究及疫苗效力评价。 |
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(2025-6-4)
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