Low-Input CUT&RUN for Mouse Oocytes and Preimplantation Embryos

胚胎 劈理(地质) 卵母细胞 细胞生物学 免疫沉淀 刀豆蛋白A 核酸酶 染色质 DNA 化学 生物 分子生物学 抗体 遗传学 生物化学 体外 古生物学 断裂(地质)
作者
Ryoya Hayashi,Azusa Inoue
出处
期刊:Methods in molecular biology [Springer Science+Business Media]
卷期号:2577: 83-92 被引量:12
标识
DOI:10.1007/978-1-0716-2724-2_6
摘要

Cleavage Under Target & Release Using Nuclease (CUT&RUN) enables the detection of DNA regions that are bound by a protein of interest. This method is suitable for low-input materials because of the absence of an immunoprecipitation step. However, it sometimes fails when applying it to fragile cells, such as mouse oocytes. Here we describe our low-input CUT&RUN protocol optimized for mouse oocyte and preimplantation embryo samples in which the primary antibody and protein A-MNase binding steps are completed before the cells are bound to Concanavalin A-coated magnetic beads. This modification prevents crush of oocytes and early embryos and unwanted loss of chromatin during CUT&RUN procedures.
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