人大肠癌HCT-8/5-FU耐药细胞株的建立及P-gp测定

目的：建立人大肠癌多药耐药细胞株HCT-8／5-FU及并对其耐药机制进行探讨． 方法：先采用较大剂量间歇诱导法进行筛选，再采用浓度梯度递增法作用，历时7mo，至HCT8细胞可长期在5-FU浓度为2．0mg／L的细胞培养液中稳定生长．电镜、HE染色观察2种细胞形态结构差异．体外细胞毒性实验观察他对5-FU,ADM，DDP的耐药性．绘制亲本细胞和耐药细胞的体外生长曲线．罗丹明染色法检测其两种细胞P—gp功能表达． 结果：HCT-8细胞株经7mo诱导，可在5-FU 2．0g/L的培养液中稳定增殖，具有多药耐药性，命名为HCT-8／5-FU，该细胞株对5-FU的耐药指数为16．6，并对ADM，DDP有交叉耐药性．该细胞株体外群体倍增时间与亲本细胞差别不显著．HE染色观察耐药细胞胞体较亲本细胞大，细胞核不规则，可见双核、多形核，细胞形态不规则，呈多角形、细长形改变，可见巨核细胞．透射电镜下耐药细胞胞质内线粒体、内质网、溶酶体增多．流式细胞仪罗丹明染色法观察荧光强度曲线左移，提示耐药细胞有过度P—gp表达． 结论：成功建立HCT-8／5-FU多药耐药细胞株．先采用较大剂量间歇诱导进行筛选，再采用浓度梯度递增法作用是诱导大肠癌耐药细胞株的较好方式．HCT-8／5-FU细胞株的耐药机制与P-糖蛋白表达有关．