Rac1及Cdc42在肾上腺髓质肽（AM）缓解嘌呤霉素氨基核苷（PAN）所诱导足细胞损伤中作用机制的初步探讨

目的观察肾上腺髓质肽（adrenomedullin，AM）对嘌呤霉素氨基核苷（puromycin aminonucleoside，PAN）所诱导受损足细胞的作用以及Rac1/Cdc42表达变化，初步探讨其可能机制。 方法将小鼠肾足细胞株分为对照组、PAN处理组（100 μg/mL）、PAN联合AM处理组（10-7 mol/L）及PAN联合AM和蛋白激酶A（PKA）抑制剂H89（10-6 mol/L）处理组。经一次性腹腔注射PAN（150 mg/kg）建立大鼠足细胞损伤模型，每天经尾静脉注射AM蛋白（66 μg/kg）进行干预。SDS-PAGE法检测尿蛋白水平，电镜观察足细胞足突宽度变化，双重免疫荧光染色及/或Western blot观察足细胞特异性骨架蛋白（synaptopodin、nephrin）、Rac1及Cdc42的蛋白表达水平，实时定量PCR（qRT-PCR）检测synaptopodin、nephrin的mRNA表达，谷胱甘肽巯基转移酶-拉下实验（GST-pull down assay）法检测Rac1及Cdc42活性变化。 结果PAN在体内、外均显著降低synaptopodin、nephrin的蛋白或/及mRNA表达水平，且显著升高desmin表达；大鼠PAN肾病模型的尿蛋白水平显著升高，足突宽度显著增加；PAN显著降低Rac1、Cdc42总蛋白及活性水平。上述由PAN所介导的效应被AM显著抑制；H89显著阻断AM的体外作用。 结论AM主要通过PKA通路促进受损足细胞的修复，该保护机制与AM调控Rac1/Cdc42表达密切相关。