Self-processing of ribozyme-flanked RNAs into guide RNAs in vitro and in vivo for CRISPR-mediated genome editing

CRISPR/Cas9 使用执行顺序特定的 DNA 劈开和它的一个指南 RNA (gRNA ) 分子广泛地被使用了染色体在许多有机体编辑。在 gRNAs 的任何一个结束的修正经常使 Cas9/gRNA 变为不活跃。到目前为止，在 vivo 的 gRNA 的生产被使用 U6 和 U3 snRNA 倡导者仅仅完成了。然而， U6 和 U3 倡导者有象房间特性和不适当的缺乏那样的主要限制为在 vitro 抄写。这里，我们在场为高效地在 vitro 并且在 vivo 生产 gRNAs 的一个万用的方法。我们设计人工的基因命名 RGR 一旦抄录，那在设计 gRNA 的两结束与 ribozyme 序列产生一个 RNA 分子。我们证明 RGR 的主要抄本经历自我催化的劈开产生需要的 gRNA，它能高效地在 vitro 并且在酵母指导 DNA 目标的顺序特定的劈开。RGR 能从任何倡导者被抄录并且因此允许如果适当倡导者被选择，编辑的房间特定、织物特定的染色体。检测 CRISPR 产生的变化被酶消化经常完成，它不与高产量的分析很兼容。我们的系统允许通用教材到的使用在 vitro 生产任何 gRNAs，它然后能与 Cas9 蛋白质被使用检测 gRNAs/CRISPR 引起的变化。在结论，我们为在特定的房间和纸巾产生指向的变化，并且为高效地检测产生的变化提供一个万用的方法。