A Nonviral piggyBac Transposon-Mediated Method to Generate Large-Scale CAR-NK Cells from Human Peripheral Blood Primary NK Cells

电穿孔 嵌合抗原受体 转染 转导(生物物理学) 生物 细胞生物学 白细胞介素12 免疫学 免疫疗法 细胞培养 基因 细胞毒性T细胞 免疫系统 体外 遗传学 生物化学
作者
Zhicheng Du,Tianzhi Zhao,Xianjin Chen,Shijun Zha,Shu Wang
出处
期刊:Methods in molecular biology [Springer Science+Business Media]
卷期号:: 279-288
标识
DOI:10.1007/978-1-0716-3593-3_18
摘要

With the inherent antitumor function and unique “off-the-shelf” potential, genetically engineered human natural killer (NK) cells with chimeric antigen receptors (CARs) bear great promise for the treatment of multiple hematological malignancies and solid tumors. Current methods of producing large-scale CAR-NK cells mainly rely on mRNA transfection and viral vector transduction. However, mRNA CAR-NK cells were not stable in CAR expression while viral vector transduction mostly ended up with low efficiency. In this chapter, we described an optimized protocol to generate CAR-NK cells by using the piggyBac transposon system via electroporation and to further expand these engineered CAR-NK cells in a large scale together with artificial antigen-presenting feeder cells. This method can stably engineer human primary NK cells with high efficiency and supply sufficient scale of engineered CAR-NK cells for the future possible clinical applications.
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