hCGβ-CTP37多聚体的表达、纯化及其多克隆抗体的制备

目的:研究重组hCGβ-CTP37(CTP)多聚体编码基因在大肠杆菌BL21中的表达及表达产物多克隆抗体的制备.方法:分别将3、4个CTP编码基因通过串联的方式连接起来组成多聚体编码基因,进而将多聚体基因亚克隆入载体pGEX-4T-2中获得含目的基因的表达质粒pGEX-4T-2-(CTP)n(n=3,4).表达质粒转入大肠杆菌BL21,目的蛋白在IPTG诱导下进行表达.表达产物经谷胱甘肽转硫酶(GST)亲和层析柱纯化、凝血酶酶解去除GST后,获得多肽CTP3和CTP4.将其用于免疫家兔以制备多克隆抗体,并用ELISA法检测抗体滴度.结果:菌株经IPTG诱导后产生了大量可溶性的融合蛋白GST-CTPn(n=3,4),SDS-PAGE分析表明融合蛋白GST-CTP3和GST-CTP4的表观分子量分别为38.0kDa和42.2kDa,纯化后的融合蛋白的纯度达到了90%以上;纯化的融合蛋白经牛凝血酶酶解,利用制备型SDS-PAGE纯化,回收获得的多肽CTP3和CTP4的纯度均大于80%;将多肽CTP3和CTP4多次免疫家兔后,ELISA检测结果证实产生了滴度较高的多克隆抗体.结论:CTP多聚体能刺激家兔产生特异性抗体,这提示CTP多聚体有可能作为避孕疫苗或肿瘤疫苗的免疫原.