缺氧/放射活化Epo/e9增强子调控layilin siRNA表达以抑制人肺腺癌A549细胞侵袭的研究

背景与目的：Layilin是一种新发现与肺腺癌侵袭转移有密切联系的特异性透明质酸受体。本研究旨在观察缺氧/放射条件下活化缺氧/放射双敏感性增强子（Epo/e9）,调控针对layilin的小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）表达,探讨其对人肺腺癌A549细胞受透明质酸诱导侵袭的影响。方法：构建携带Epo/e9增强子和U6启动子且表达针对layilin的siRNA的RNA干扰载体（Epoo/e9-siLay plasmid）和阴性对照RNA干扰载体（Epo/e9-siCtrl plasmid）,分别转染A549细胞,新霉素抗性筛选得到layilin表达受抑制的A549_（Epo/e9-siLay）细胞和layilin表达未受影响的A549_（Epo/e9-siCtrl）细胞。针对非转染A549（A549_（untransfected））、A549_（Epo/e9siLay）、A549_（Epo/e9-siCtrl）三组细胞,在缺氧/放射处理下,分别采用RT-PCR和和Western blot检测layilin mRNA和和蛋白表达,用Transwell模型检测细胞侵袭能力。结果：与A549_（untransfected）组相比,A549_（Epo/e9-siLay）组layilin表达显著减弱（P〈0.01）,Transwell穿膜细胞数显著减少（P〈0.01）;A549_（Epo/e9-siCtrl）组layilin表达、Transwell穿膜细胞数皆和A549_（untransfected）组无显著差异（P〉0.05）。缺氧/放射处理能进一步增加和RNA干扰的上述效应（P〈0.01）。结论：在缺氧/放射条件下,Epo/e9增强子调控layilin siRNA表达能明显抑制A549细胞侵袭行为。