Expression of peripheral interleukin-35 and its modulatory effect on regulatory T cell functions in patients with alopecia areata

摘要： 【摘要】 目的 观察斑秃患者外周血白细胞介素35（IL-35）表达变化，评估IL-35对斑秃患者调节性T细胞（Treg）活性的调控。方法 收集2019年12月至2021年1月在山西省人民医院就诊的斑秃患者81例（斑秃组）和健康志愿者27例（对照组），分离血清和外周血单个核细胞（PBMC），酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清IL-35水平，实时荧光定量PCR法检测IL-35组成亚基EBI3和IL-12p35 mRNA表达，流式细胞仪检测CD4+CD25+CD127dim/-Treg比例。使用重组人IL-35刺激纯化的Treg，ELISA检测培养上清液中穿孔素和颗粒酶B水平，实时荧光定量PCR检测EBI3、IL-12p35和免疫检查点分子程序性死亡蛋白1、黏蛋白结构域蛋白3、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4、淋巴细胞活化基因3 mRNA表达；将经IL-35刺激或未刺激的Treg与自体PBMC共培养，用细胞计数试剂盒8检测细胞增殖水平。计量资料两组之间比较采用t检验，多组之间比较采用单因素方差分析，相关性分析采用Pearson检验；计数资料比较采用卡方检验。结果 与对照组比较，斑秃组IL-35水平［（90.10 ± 11.98） ng/L比（100.74 ± 28.71） ng/L，t = 2.71，P = 0.008］、PBMC中EBI3 mRNA（1.06 ± 0.15比1.25 ± 0.11，t = 6.09，P < 0.001）、IL-12p35 mRNA（1.00 ± 0.15比1.38 ± 0.22，t = 10.16，P < 0.001）、Treg比例（5.91% ± 1.17%比6.85% ± 1.23%，t = 3.54，P = 0.001）均显著降低。斑秃组Treg比例与血清IL-35水平（r = 0.25，P = 0.026）、PBMC中EBI3 mRNA（r = 0.31，P = 0.004）、IL-12p35 mRNA水平（r = 0.24，P = 0.032）均呈正相关。斑秃组未刺激的Treg分泌穿孔素、颗粒酶B水平以及EBI3、IL-12p35、免疫检查点分子mRNA表达均显著低于对照组Treg（P < 0.05或0.001），抑制PBMC增殖的能力亦低于对照组（P = 0.013）。重组人IL-35刺激后斑秃患者Treg分泌穿孔素和颗粒酶B水平与未刺激Treg相比无明显变化（P > 0.05），但EBI3、IL-12p35、免疫检查点分子mRNA表达均显著升高（P < 0.05或0.001），抑制PBMC增殖的能力亦增强（P = 0.037）。结论 斑秃患者外周血IL-35水平明显降低，与Treg功能减弱密切相关，可能参与斑秃发病。