Sisal wool skin disease in Merino sheep in the Argentine Patagonia region: Identification and molecular diagnosis of Corynebacterium bovis from skin lesions

Sisal wool condition is a skin disease affecting Merino sheep in the Argentine Patagonia region. Corynebacterium spp. isolates have previously been isolated from skin swabs from lesions, while specific identification of the bacteria involved has not been reported.The aim of this work was to characterize the bacterial agent isolated from sisal wool lesions and to develop a diagnostic method for field surveillance.Molecular identification of a collection of 72 isolates obtained previously was performed using PCR and 16S rRNA and rpoB sequencing. A field survey was carried out on two farms in the Río Negro province of Argentine Patagonia. Swab samples from sheep with and without skin lesions were collected and analysed by PCR and culture.Isolates analysed were confirmed by sequencing as Corynebacterium bovis. Using a PCR test without culture step, all field samples from affected sheep were positive for C. bovis; samples from the healthy skin from the same animals or clinically healthy sheep all were negative.Sisal wool skin disease was associated with C. bovis infection based on culture and PCR methods; the latter may be useful for helping to pursue a disease control strategy.La dermatose de la laine de sisal est une maladie de peau affectant les moutons mérinos dans la région de la Patagonie argentine. Les souches de Corynebacterium spp. ont été auparavant isolées à partir d'écouvillons cutanés de lésions, alors que l'identification spécifique des bactéries impliquées n'a pas été rapportée. HYPOTHÈSES/OBJECTIFS: Le but était de caractériser l'agent bactérien isolé des lésions et de développer une méthode de diagnostic pour la surveillance de terrain. MATÉRIELS ET MÉTHODES: L'identification moléculaire d'une collection de 72 isolats obtenus précédemment a été réalisée par PCR et séquençage de l'ARNr 16S et rpoB. Une enquête de terrain a été menée dans deux fermes de la province de Río Negro en Patagonie argentine. Des écouvillons de moutons présentant des lésions cutanées ont été prélevés et analysés par PCR et culture. RÉSULTATS: Les isolats analysés ont été confirmés par séquençage comme Corynebacterium bovis. En utilisant un test PCR sans étape de culture, tous les échantillons prélevés sur le terrain provenant de moutons affectés étaient positifs pour C. bovis ; les échantillons de peau saine des mêmes animaux ou de moutons cliniquement sains étaient tous négatifs.La dermatose de laine de sisal a été associée à une infection à C. bovis sur la base des méthodes de culture et de PCR ; ce dernier peut être utile pour aider à poursuivre une stratégie de lutte contre la maladie.INTRODUCCIÓN: La condición de la lana de sisal es una enfermedad de la piel que afecta a los ovinos Merino en la región de la Patagonia Argentina. Aislados de Corynebacterium spp. se han obtenido previamente de hisopos de lesiones cutáneas, mientras que no se ha informado la identificación específica de las bacterias involucradas. HIPÓTESIS/OBJETIVOS: El objetivo de este trabajo fue caracterizar el agente bacteriano aislado de lesiones de lana de sisal y desarrollar un método de diagnóstico para la vigilancia en campo. MATERIALES Y MÉTODOS: La identificación molecular de una colección de 72 aislamientos obtenidos previamente se realizó mediante PCR y secuenciación de rRNA 16S y rpoB. Se realizó un estudio de campo en dos fincas de la provincia de Río Negro en la Patagonia argentina. Se recolectaron muestras de hisopos de ovejas con lesiones en la piel y se analizaron mediante PCR y cultivo. RESULTADOS: Los aislamientos analizados fueron confirmados por secuenciación como Corynebacterium bovis. Usando una prueba de PCR sin paso de cultivo, todas las muestras de campo de las ovejas afectadas fueron positivas para C. bovis; todas las muestras de piel sana de los mismos animales o de ovejas clínicamente sanas fueron negativas. CONCLUSIONES Y RELEVANCIA CLÍNICA: la enfermedad de la piel de la lana de sisal se asoció con la infección por C. bovis según los métodos de cultivo y PCR; este último método puede ser útil para ayudar a seguir una estrategia de control de enfermedades.Eine Beeinträchtigung der Sisalwolle kommt bei Merinoschafen in der Region des argentinischen Patagoniens vor. Corynebacterium spp. wurde schon zuvor von Hauttupfern dieser Läsionen isoliert, während eine spezifische Identifizierung der beteiligten Bakterien noch nicht veröffentlicht wurde.Das Ziel dieser Arbeit war es, die Bakterien aus dieser Sisalwolle zu isolieren und eine diagnostische Methode für eine Bestandsüberwachung zu entwickeln.Es wurde eine molekulare Identifizierung einer Sammlung von 72 früheren Isolaten mittels PCR und 16S rRNA und rpoB Sequenzierung durchgeführt. Eine Feldstudie wurde auf zwei Farmen in der Rio Negro Provinz im argentinischen Patagonien durchgeführt. Tupferproben von Schafen mit Hautveränderungen wurden gesammelt und mittels PCR und Kultur analysiert.Die analysierten Isolate wurden mittels Sequenzierung als Corynebacterium bovis bestätigt. Ohne weitere Kultur waren alle Feldproben der betroffenen Schafe mittels PCR-Test positiv auf C. bovis; Proben der gesunden Haut derselben Tiere oder von klinisch gesunden Schafen waren alle negativ.Basierend auf Kultur und PCR Methoden stand eine Erkrankung der Sisalwolle mit einer C.bovis Infektion in Zusammenhang; die PCR Analyse könnte eine hilfreiche Methode sein, um eine Strategie zur Krankheitskontrolle zu verfolgen.背景: サイザルウール病は、アルゼンチン・パタゴニア地方のメリノ種羊が罹患する皮膚病である。これまでに病変部の皮膚スワブからコリネバクテリウム属菌が分離されているが、関与する菌の特定は報告されていない。 仮説/目的: 本研究の目的は、サイザルウール病変から分離された細菌の特徴を明らかにし、野外調査用の診断法を開発することであった。 材料と方法: 過去に分離された72株のコレクションに対し、PCR、16S rRNAおよびrpoBの塩基配列を用いた分子生物学的同定を実施した。アルゼンチン・パタゴニアのRío Negro州にある2つの農場で野外調査を行った。皮膚病変のある羊からスワブサンプルを採取し、PCR法および培養法で解析した。 結果: 解析された分離株は、シークエンスによりCorynebacterium bovisと確認された。培養を伴わないPCR検査では、罹患羊の野外サンプルはすべてC. bovis陽性であった。同じ動物の健康な皮膚や臨床的に健常な羊のサンプルはすべて陰性であった。 結論および臨床的意義: サイザルウール皮膚病は、培養法およびPCR法においてC. bovis感染と関連しており、後者は防疫戦略の一助となる可能性が示唆された。.背景: 阿根廷巴塔哥尼亚地区，西萨尔羊毛病是一种会发生在美利奴羊身上的皮肤病。以前曾用棉签从病变处皮肤采样，分离出棒状杆菌属分离株，而对所涉及的细菌进行特异性鉴定尚未见报道。 假设/目的: 工作的目的是表征从西萨尔羊毛病变中分离的细菌病原体，并开发用于实地监测的诊断方法。 材料和方法: 用PCR、16S rRNA和 rpoB 测序对先前获得的72株分离株进行分子鉴定。对阿根廷巴塔哥尼亚的里奥内格罗省的两个农场进行了实地调查。棉签采集绵羊的皮肤病变样本，通过 PCR 和培养进行分析。 结果: 分析的分离株经测序证实为牛棒状杆菌。采用无培养步骤的 PCR 试验，所有发病绵羊的实地样品均为牛棒状杆菌阳性；相同动物或临床健康绵羊的健康皮肤样品均为阴性。 结论和临床相关性: 基于培养和 PCR 方法，西萨尔羊毛病与牛棒状杆菌感染相关；前者可能有助于寻求疾病控制策略。.Resumo CONTEXTO: Lã em sisal é uma dermatopatia que afeta as ovelhas Merino na região da Patagônia Argentina. Corynebacterium spp. já foram isoladas anteriormente de swabs coletados de lesões cutâneas, mas ainda não há relatos de identificação da espécie bacteriana envolvida nessa condição. HIPÓTESE/OBJETIVOS: O objetivo deste trabalho foi caracterizar o agente bacteriano isolado de lesões de lã em sisal e desenvolver um método diagnóstico para utilização a campo. MATERIAIS E MÉTODOS: Realizou-se a identificação molecular de uma coleção de 72 isolados obtidos previamente utilizando PCR e sequenciamento de 16S rRNA e rpoB. Uma pesquisa de campo foi realizada em duas fazendas na província de Rio Negro, na Patagônia Argentina. Amostras coletadas por swabs de ovelhas com lesões cutâneas foram coletadas e analisadas por PCR e cultura. RESULTADOS: Os isolados analisados foram confirmados por sequenciamento como sendo da espécie Corynebacterium bovis. Utilizando um teste de PCR sem a realização de cultura, todas as amostras de campo das ovelhas afetadas foram positivas para C. bovis; amostras de pele saudável dos mesmos animais ou ovelhas clinicamente saudáveis foram todas negativas. CONCLUSÕES E RELEVÂNCIA CLÍNICA: A doença da lã em sisal foi associada à infecção por C. bovis baseado em métodos de cultura e PCR; o último pode ser ajudar a traçar uma estratégia de controle da doença.