A Protocol for Flavonols, Kaempferol and Quercetin, Staining in Plant Root Tips

Flavonols are a subclass of flavonoids of the group of plant secondary metabolites. In planta, flavonols play various functions such as antioxidant and natural regulator of auxin polar transport. Many lines of evidence have shown that flavonols also contribute to human health in anti-oxidation, anti-inflammation, and even prevention some types of cancer. Several methods have been utilized to measure flavonols such as high-performance liquid chromatography (HPLC), liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS), and diphenylboric acid-2-aminoethyl ester (DPBA) staining. While HPLC or LC-MS can quantitatively determine the level of flavonols, DPBA staining can provide an in-situ view of flavonols accumulation in the plants. In this protocol, a detailed procedure for staining the flavonols in Arabidopsis root tips is described. Five-day-old Arabidopsis seedlings are soaked in a solution containing DPBA and latterly the flavonols (kaempferol and quercetin) can be observed under a confocal microscope., [摘要]黄酮醇是植物次生代谢物中黄酮类的一个亚类。在植物中，黄酮醇具有多种功能，例如抗氧化剂和生长素极性转运的天然调节剂。许多证据表明，黄酮醇还有助于抗氧化，抗炎症甚至预防某些类型的癌症，从而对人类健康做出贡献。几种方法已用于测量黄酮醇，例如高效液相色谱（HPLC），液相色谱-质谱（LC-MS）和二苯硼酸-2-氨基乙基酯（DPBA）染色。HPLC或LC-MS可以定量测定黄酮醇的含量 DPBA染色可以提供植物中黄酮醇积累的原位视图。在该协议中，描述了对拟南芥根尖中的黄酮醇进行染色的详细步骤。将五天大的拟南芥幼苗浸入含有DPBA的溶液中，然后在共聚焦显微镜下观察黄酮醇（山ka酚和槲皮素）。[背景]在拟南芥，黄酮醇是从缩合反应对香豆酰基辅酶A的一个分子和丙二酰-CoA的三个分子之间生物合成。Lewis等。（2011年）发现槲皮素而不是山奈酚是根型根茎植物生长素转运的抑制剂。此外，黄酮醇也可作为植物和人类的有效抗氧化剂。先前的研究调查了DPBA与黄酮醇相互作用时可以发出荧光（Sheahan和Rechnitz，1992）。基于此，DPBA已被广泛应用于检测植物中黄酮醇的积累（Nguyen等，2013、2015和2016 ； Vu等，2015）。在此，描述了用于基于DPBA的黄酮醇检测的详细协议。除拟南芥外，该方案还可用于其他植物，例如甘蓝型油菜（Vu等人，2015）。由于其他植物物种可能比拟南芥更厚和更大的组织，因此可以施加真空以促进DPBA渗透到植物组织中。