轮状病毒VP4蛋白酶切片段VP5＊、VP8＊在原核系统中的表达

目的克隆表达轮状病毒结构蛋白VP4酶切片段VP5＊、VP8＊。方法以猴轮状病毒SA11株细胞培养物提取总RNA为模板，经RT—PCR方法获得VP5＊、VP8＊全长基因片段cDNA，将其重组于pET-30a表达载体，转化大肠杆菌BL21（plyss），异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达，表达产物做SDS—PAGE和Western—blotting检测，目的产物用镍柱纯化。结果①重组载体在IPTG诱导下，工程菌表达的两个目的蛋白主要以包涵体形式存在；②SDS—PAGE检测表达产物与目的蛋白大小一致，VP5＊为60kD，VP8＊为28kD，Western—blotting检测发现两目的蛋白所带标签可与抗体反应；③镍柱纯化获得RVSA11VP5＊、VP8＊蛋白，纯度达90％。结论①构建表达载体pET-30a—VP5＊、pET-30a—VP8。；②表达、纯化VP4蛋白的VP5＊、VP8＊片段。