The effectiveness of ethylene glycol as cryoprotectant in mouse embryo freezing with slow freezing method

목적: 포유류의 배아를 냉동하는 과정에서, 냉동 보호제와 냉동 방법은 해동 후 생존률과 그 이후의 배아 발달에 매우 중요한 인자이다. 이 실험에서 첫 번째로 완만 동결법에서 냉동 보호제인 ethylene glycol (EG)이 배아 발달에 어떤 영향을 끼치는지를 알아보고자 하였고, 두 번째로 각각의 배아 발달 시기에서 동결 방법에 따른 배아의 생존율 및 발달율 차이를 알아보고자 하였다. 연구 방법: 5-6주된 ICR생쥐로부터 1세포기 배아를 얻었다. 배아 배양을 위한 기본 배양액으로 0.4% BSA가 함유된 T6배지를 사용하였다. 1세포기, 8세포기, 포배기의 배아는 각각 EG, propylene glycol (PROH), glycerol을 사용하여 완만 동결법으로 냉동 보존하였다. 실험 후반부에서 동일한 냉동 보호제인 EG를 사용하여 완만 동결법과 초자화 동결법의 결과를 비교하였다. 끝으로 각 군별로 포배기 배아의 세포수를 측정하여 포배기의 질을 평가하였다. 결과: EG, PROH와 glycerol사이에 회수율, 생존율에서 유의할 만한 차이점은 발견할 수 없었다. 그러나 해동 후 배아 발달에 있어서는 EG군이 1세포기와 포배기 냉동 보존을 하였을 때 우수한 배아 발달을 보였다(P<0.05). 완만 동결법과 초자화 동결법의 비교에서 회수율은 두 그룹간에 차이를 보이지 않았으나, 초자화 그룹에서 유의하게 높은 생존율을 보여주었다(P<0.05). 해동 후 상실기와 포배기로의 발달에 있어서는 1세포기 냉동 보존시 초자화 동결법에서 좋은 발달율을 보였지만 (P<0.05) 8세포기와 포배기에서는 유의한 차이가 없었다. 포배기 배아의 세포수에 있어서 1세포기에 EG를 이용하여 냉동 보존된 군이 PROH, glycerol군에 비해 많은 것으로 나타났다 (P<0.05). 그러나 두 가지 냉동 방법에 따른 포배기 세포수의 차이는 없었다. 결론: 이상의 결과로 생쥐 배아 냉동시, EG가 지금까지 사용된 냉동 보호제인 PROH나 glycerol보다 우수한 것으로 나타났다. 냉동 방법은, 초자화 동결법이 완만 동결법보다 우수하였다.