Improvement of Molecular Genetic Diagnostics of Infections Caused by Mycoplasma Pneumoniae and Chlamydia Pneumoniae

Цель. Усовершенствовать метод выявления ДНК Mycoplasma pneumoniae и Сhlamydia pneumoniae с использованием полимеразной цепной реакции в режиме реального времени на основе выбора оригинальных праймеров и проб для качественной, количественной и дифференциальной диагностики инфекций.Материалы и методы. Методологический подход включал выбор специфических последовательностей из геномов Mycoplasma pneumoniae и Сhlamydia pneumoniae для дизайна праймеров и проб, создание положительного контрольного образца, подбор условий амплификации; апробация метода проведена на образцах ДНК, выделенных из соскобов эпителиальных клеток из полости носа, ротоглотки и мокроты детей с бронхитами и пневмониями.Результаты. Усовершенствован метод на основе мультиплексной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, характеризующийся высокой аналитической чувствительностью – 10 копий ДНК Mycoplasma pneumoniae и Сhlamydia pneumoniae на реакцию, и специфичностью, составившей 100%.Выводы. Данный метод позволяет одновременно проводить выявление ДНК Mycoplasma pneumoniae и Сhlamydia pneumoniae и определять концентрацию ДНК Mycoplasma pneumoniae в мокроте. Purpose. Optimize the detection of Mycoplasma pneumoniae and Сhlamydia pneumoniae by real-time polymerase chain reaction on the base of the choice of original primers and probes for qualitative, quantitative and differential diagnostics of infections.Materials and methods. The methodological approach included the development of primers and probes specific for genome sequences of Mycoplasma pneumoniae and Сhlamydia pneumoniae, positive control DNA template, polymerase chain reaction conditions; the method was tested on DNA samples isolated from nasopharyngeal swabs and sputum of children with bronchitis and pneumonia.Results. The optimized method is based on the real-time multiplex polymerase chain reaction, the method’s analytical sensitivity is 10 copies of each Mycoplasma pneumoniae and Chlamydia pneumoniae DNA per reaction, and specificity – 100%.Conclusions. The optimized method gives the possibility to detect simultaneously Mycoplasma pneumoniae and Chlamydia pneumoniae DNA and determine the concentration of Mycoplasma pneumoniae DNA in sputum.