Circ_0086376 targeted miR-5195-3p to regulate the expression of inflammatory factors mediated by Propionibacterium acnes in HaCaT cells

摘要： 【摘要】 目的 探讨环状RNA circ_0086376对微小RNA miR-5195-3p的调控作用及对痤疮相关炎症因子表达的影响。方法 构建过表达和干扰circ_0086376的HaCaT稳定细胞株，与痤疮丙酸杆菌（P.acne）共培养，采用实时荧光定量（qRT）PCR检测共培养对circ_0086376表达的影响，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养上清液中炎症因子的表达。将过表达或干扰circ_0086376质粒、模拟或抑制miR-5195-3p片段的慢病毒转染HaCaT细胞，采用ELISA检测过表达或干扰circ_0086376及与P.acne共培养对HaCaT细胞培养上清液中炎症因子的表达。采用荧光素酶活性实验验证circ_0086376与miR-5195-3p的靶向性。采用ELISA检测过表达/干扰circ_0086376与模拟/抑制miR-5195-3p对与P.acne共培养的HaCaT细胞培养上清液中炎症因子表达的影响。结果 P.acne与HaCaT细胞共培养后，培养上清液中下述炎症因子水平均高于单纯HaCaT细胞组，白细胞介素（IL）1β［（355.80 ± 23.20）比（260.50 ± 16.58） pg/ml，t = 5.79，P < 0.01］、IL-6［（38.04 ± 2.69）比（14.33 ± 0.75） pg/ml，t = 14.65，P < 0.01］、IL-12［（10.87 ± 0.78）比（6.52 ± 0.77） pg/ml，t = 6.89，P < 0.01］、IL-18［（222.60 ± 21.07）比（146.10 ± 9.14） pg/ml，t = 5.77，P < 0.01］和肿瘤坏死因子α（TNF-α）［（50.39 ± 1.29）比（20.46 ± 0.83） pg/ml，t = 33.83，P < 0.01］。circ空载体 + P.acne组HaCaT细胞培养上清液中IL-1β、IL-6、IL-12、IL-18和TNF-α表达水平高于过表达circ空载体组，circ过表达 + P.acne组上述炎症因子水平低于过表达circ空载体 + P.acne组（均P < 0.01）；干扰circ空载体 + P.acne组HaCaT细胞培养上清液中IL-1β、IL-6、IL-12、IL-18和TNF-α表达水平高于干扰circ空载体组，干扰circ + P.acne组高于干扰circ空载体 + P.acne组（均P < 0.01）。荧光素酶活性实验证实circ_0086376可与miR-5195-3p结合。circ过表达组细胞IL-1β、IL-6、IL-12、IL-18和TNF-α表达水平低于空载体组（均P < 0.05），circ过表达 + miR模拟组上述炎症因子水平高于circ过表达组（均P < 0.05）；干扰circ组细胞各炎症因子表达水平高于空载体组，干扰circ + miR抑制组细胞各炎症因子水平低于干扰circ组（均P < 0.05）。结论 circ_0086376可通过靶向下调miR-5195-3p来抑制痤疮相关炎症因子表达。