Fluorescence Intensity Decay Shape Analysis Microscopy (FIDSAM) for Quantitative and Sensitive Live-Cell Imaging: A Novel Technique for Fluorescence Microscopy of Endogenously Expressed Fusion-Proteins

作者
Frank,Schleifenbaum,Kirstin,Elgass,Marcus,Sackrow,Katharina,Caesar,Kenneth Kenneth,Berendzen,Alfred,Meixner,Klaus Klaus,Hatter
出处
期刊:分子植物:英文版 卷期号: (3): 555-562
摘要

荧光灯象共焦的显微镜学和荧光一生成像那样的生活植物房间的研究经常受不了显著地在高空间的分辨率把动态图象对比和量的存取归结为亚 cellular 进程的强壮的 autofluorescent 背景贡献。这里,我们在场新奇 techniquefluorescence 紧张腐烂形状分析显微镜学(FIDSAM ) 到提高至少一个数量级的一幅荧光图象的动态对比。方法基于荧光紧张腐烂(荧光一生曲线) 的形状的分析并且得益于典型荧光标签染料的腐烂模式强烈不同于 autofluorescent 样品区域的排放腐烂曲线的事实。用 FIDSAM,我们在他们的织物环境调查了 Arabidopsis thaliana 胚轴房间,它积累血浆膜标记蛋白质 LTI6b (LTI6beGFP ) 的 eGFP 熔化到底层。而在常规共焦的荧光图象,附近的房间的膜几乎不能光学地由于房间墙的强壮的 autofluorescence 被解决, FIDSAM 允许在高空间的分辨率的单个、孤立的膜的成像。因此, FIDSAM 将在生活植物房间启用甚至低快车的标注 fluorophore 的蛋白质的亚 cellular 分析。而且,有荧光一生成像的 FIDSAM 的联合提供基础在生活植物房间学习标注 fluorophore 的 biomolecules 的本地物理化学的环境。

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