LC-MS/MS法测定人血浆中吡非尼酮及其代谢产物的浓度

目的建立LC-MS/MS法测定人血浆中吡非尼酮 (pirfenidone，BT) 及其主要代谢产物5-羧基吡非尼酮 (5-carboxy-pirfenidone，SBT) 的含量。 方法血浆样品加入氘代同位素内标吡非尼酮-d5(dBT) 和5-羧基吡非尼酮-d5(dSBT)，经甲醇沉淀蛋白后进样。液相分离采用Agilent ZORBAX SB C18(3.0 mm×100 mm，3.5 μm) 色谱柱，流动相为水 (含0.5%甲酸)/乙腈 (50/50)。质谱检测采用ESI离子源，正离子多反应检测模式检测。BT、SBT、dBT和dSBT的检测目标离子对分别为m/z 185.958/77.1、215.944/77.0、190.965/81.1和220.948/99.1。 结果空白溶剂、空白血浆无干扰，分析物及内标间无相互干扰。血浆中BT和SBT分别在0.020 59~25.14 mg·L-1和0.016 73~20.42 mg·L-1范围内线性关系良好。批内、批间精密度和准确度均在可接受范围内。分析物及内标储备液于4 ℃冰箱中放置156 d，血浆样本于室温放置4 h、-70 ℃冰箱中保存并反复冻融3次、-70 ℃冰箱保存10、29、52 d及样品处理后自动进样器 (8 ℃) 中放置24 h的情况下均稳定。BT和SBT的平均提取回收率和归一化基质因子均在可接受范围内。 结论本研究所建立的测定BT和SBT血浆药物浓度的LC-MS/MS分析方法具有良好的特异性、准确度、精密度、灵敏度、稳定性和耐用性，适用于人血浆中吡非尼酮及其代谢物的浓度测定及其药动学研究。