Dual-Colour STED-microscopy on the Nanoscale

Gesttigte Entvlkerung durch stimulierte Emission (engl.: STED) ist das erste Konzept, welches die Abbesche Beugungsgrenze in der optischen Fernfeld-Mikroskopie berwindet und erfolgreich in der Zellbiologie angewandt wurde.Jedoch war die theoretisch unbegrenzte Auflsung durch Ausbleichen der Farbstoffmolekle limitiert.In dieser Arbeit wird in einer umfassenden Studie zur ein-und zwei-Photonen Anregung die Dunkelzustands-Relaxation (engl.: D-Rex) als ein effektives Mittel der Bleichreduzierung nachgewiesen, welche gleichzeitig eine enorme Fluoreszenzsignalzunahme pro Anregungspuls hervorruft.Dies bereitet den Weg fr eine erfolgreiche Kombination dieser Anregungsstrategie mit der STED-Mikroskopie und ermglicht die Anwendung einer 10-fach hheren STED-Energie aufgrund reduzierten Farbstoffbleichens.Damit wird die laterale Auflsung in der STED-Mikroskopie auf 20 nm erhht, was einer 12-fachen Auflsungserhhung ber der Abbeschen Beugungsgrenze entspricht.Dieses makromolekulare Trennungsvermgen wird auf eine