基于CRISPR/cas9系统高效编辑小鼠 Galt 基因

GALT基因突变是人类I型半乳糖血症的主要病因。拟通过CRISPR/cas9系统打靶小鼠Galt基因以模拟人GALT基因突变，从而为建立精准模拟I型半乳糖血症的动物模型奠定基础。首先分析了我国I型半乳糖血症GALT基因的致病突变位点，并将其定位在小鼠Glat基因上，作为小鼠Galt基因的拟突变位点，然后根据拟突变位点区域的序列设计了sgRNA导向序列，构建sgRNA表达质粒，将其与cas9表达质粒共转染小鼠3T3细胞，通过嘌呤霉素和杀稻瘟菌素筛选阳性转染细胞，提取阳性细胞基因组DNA，PCR扩增打靶位点的DNA片段，通过TA克隆测序鉴定基因编辑情况并分析编辑效率。结果表明，3个sgRNA导向序列均可以通过CRISPR/Cas9系统高效编辑小鼠Galt基因，编辑效率为100%。