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学位论文 共表达反式茴香脑单加氧酶与甲酸脱氢酶合成洋茉莉醛的研究 |
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共表达反式茴香脑单加氧酶与甲酸脱氢酶合成洋茉莉醛的研究 闻鹏 江南大学 摘要:洋茉莉醛是香精香料中重要的一员,在食品、化妆品以及医药等领域有重要的应用价值。洋茉莉醛主要是通过化学法合成得到,但存在反应繁琐、能耗高以及后期废液处理困难等问题。生物法合成具有反应条件温和、绿色环保等优势。本实验室开发了利用重组大肠杆菌全细胞合成洋茉莉醛的方法,本研究通过研究不同辅因子以及辅酶对反式茴香脑单加氧酶(TAO)酶活的影响,在大肠杆菌中共表达甲酸脱氢酶(FDH)与TAO,并优化其表达条件、以及全细胞催化条件,实现了洋茉莉醛的高效合成。具体实验内容如下:(1)TAO的克隆表达纯化、酶学分析及辅因子对酶活的影响:将tao基因分别克隆于质粒pET-28a、pETDuet-1、pET-20b和pGEX-6p-1中,在E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达。发现E.coli BL21 DE(3)/pETDuet-1-tao的酶活和蛋白表达量较高,其粗酶液酶活为0.71 U·OD-1。利用亲和层析的方法对E.coli BL21 DE(3)/pETDuet-1-tao粗酶液进行纯化,得到较单一目的蛋白。进行酶学分析得到:TAO最适反应温度和pH分别为30oC和8... 更多 关键词: 洋茉莉醛;反式茴香脑单加氧酶;甲酸脱氢酶;乳糖诱导;全细胞催化; 专辑: 工程科技Ⅰ辑 专题: 有机化工 DOI: 10.27169/d.cnki.gwqgu.2020.000142 分类号: TQ244.1;TQ426.97 导师: 郑璞 学科专业: 发酵工程 硕士电子期刊出版信息: 年期:2021年第01期 网络出版时间:2020-12-16—2021-01-15 |
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